花生中白藜芦醇含量的测定

1. 高效液相色谱法(GB/T24903—2010)

1)原理

试样中的白藜芦醇(resveratrol)用乙醇-水溶液提取，提取液离心后，取上清液，用配有紫外检测器的高效液相色谱仪进行测定，以外标法定量。

2)仪器

①高效液相色谱仪: 带有紫外检测器;

②粉碎机: 高速万能粉碎机，转速24000r/min，或相当的设备;

③台式离心机: 不低于5000r/min;

④微量进样器: 10μL;

⑤天平: 感量0.01g、0.0001g;

⑥滤膜: 孔径0.2μm，直径25mm的聚砜膜或相当者。

3)试剂

①无水乙醇、冰醋酸: 分析纯。

②甲醇、乙腈: 色谱纯。

③85%乙醇溶液: 取850m L乙醇，加150m L水，混匀。

④液相流动相: 乙腈+水+冰醋酸=25+75+0.09。取250m L乙腈，加入750m L水和0.9m L冰醋酸混匀，通过0.2μm的滤膜并脱气。

⑤白藜芦醇标准品: 纯度≥99%。

⑥白藜芦醇标准储备溶液: 准确称取12.5mg(精确至0.001mg)白藜芦醇标准品，用甲醇溶液溶解并定容至250m L，得到50mg/L白藜芦醇标准储备液，避光保存于4℃冰箱备用。

⑦白藜芦醇标准工作溶液: 准确移取1m L，2m L，4m L，6m L，8m L，10m L白藜芦醇标准储备液，用甲醇稀释并定容至50 m L，得到一系列的标准工作溶液，质量浓度分别为1mg/L，2mg/L，4mg/L，6mg/L，8mg/L，10mg/L。

4)操作步骤

(1)试样制备

取花生仁样品约100g，用粉碎机粉碎2～3min。称取粉碎试样约5.00g于250m L具塞三角瓶中，加入60m L85%乙醇溶液，置于80℃水浴中提取45min，不时振摇，冷却后用滤纸过滤，以少量85%乙醇溶液洗涤残渣，过滤，合并滤液，定容至100m L。移取1～2m L滤液，离心5min，离心速度不低于5000/min，离心后的上清液供进样测定。

(2)色谱参考条件

色谱柱: C18柱，150mm×3.9mm(内径)，4μm，或相当者;

流动相: 乙腈+水+冰醋酸;

流速: 0.7m L/min;

紫外检测器: 波长306nm;

柱温: 室温;

进样量: 10μL。

图13－10 白藜芦醇标准品色谱图

图13－11 样品溶液中白藜芦醇的色谱图

(3)测定

用微量进样器分别吸取等体积的白藜芦醇标准工作溶液和样品离心后的上清液进样分析，测定响应值(峰高或峰面积)，以标准工作液的浓度与相应的峰面积绘制标准曲线，以样液白藜芦醇的峰面积查标准曲线，求得相应的白藜芦醇的浓度。

5)结果计算

式中: X——样品中白藜芦醇的质量分数，mg/kg;

V——样液最终定容体积，m L;

A——样液中白藜芦醇的峰面积数值;

CS——标准溶液中白藜芦醇的浓度，mg/L;

AS——标准溶液中白藜芦醇的峰面积数值;

m——称取试样的质量，g。

6)说明及注意事项

本法适用于花生果、花生仁中白藜芦醇含量的测定。检出限为0.1mg/kg。