灵芝的菌种制备

任务二　灵芝的菌种制备

一、灵芝菌种的分离

（一）孢子弹射分离法

选菌盖肥大、形态正常、已经成熟的灵芝作为分离材料。首先将菌盖剪下，用75%的乙醇进行表面灭菌，然后将其切成1cm³的小块，并除去表面的菌肉，在剖面涂上胶水放于培养皿内，在室温下培养6～10小时后，移去分离用的组织块，用纸包好倒放在温箱中，并使温度保持在25℃～30℃，待形成菌落后，除去杂菌，转入试管中培养。

（二）组织分离法

一般选木栓化的幼嫩组织，切取生长前端的黄色幼嫩组织块，放入75%的乙醇溶液中进行表面灭菌1～2分钟，用小刀除去表面皮壳，再将组织切成0.2cm³的小块，放在培养皿中，保持在28℃黑暗的条件下培养，待形成菌落后转入试管中，要生产时再割成生产种。

二、灵芝培养料的配制

（一）木屑培养料的配制

一般以栎、柞、栗、水曲柳、国槐等木屑较好，桦、榆、杨、椴、柳、枣等木屑次之，在生产上常用杂木屑做培养料。常见的有以下几种培养料的配方：

一是木屑80%，米糠20%；

二是木屑70%，麦麸30%，另加尿素0.1%，石膏粉1%；

三是木屑60%，玉米秆粉40%，另加石膏粉2%；

四是木屑40%，棉籽壳30%，麦麸30%，另加石膏粉1%；

五是木屑75%，麦麸（或米糠）25%，另加0.2%硫酸铵。

（二）棉籽壳培养料的配制

一种为鲜棉籽壳90%，麦麸（或米糠）10%，另加石膏粉1%。另一种为棉籽壳45%，木屑45%，麦麸10%，另加蔗糖1%，尿素0.1%，石膏粉1%。

三、灵芝菌种制备

（一）适时接种

灵芝属高温性菌类，对温度的适应范围较广，灵芝菌丝正常生长温度8℃～35℃，适宜温度20℃～30℃，最适宜温度26℃～28℃，子实体分化与温度关系很大，在20℃～35℃均可分化，持续35℃以上或18℃以下不分化。应根据当地的气候条件，确定接种时间。

接种时选用15cm×30cm聚丙烯袋或瓶装料经高压灭菌1小时，恢复到常温或常压灭菌8小时，在无菌室或接种箱内接入灵芝菌种。把砍伐后约12天的直径为6～20cm的树木锯成长为15cm的短木，用40cm的竹篾箍捆紧。洗去杂质后装在65cm×80cm×0.05cm的塑料袋中，2捆为1袋，100℃恒温下保持12～14小时，具体可采用“猛火升温攻头，稳火恒温稳中，旺火加温保尾，微火趁热出灶”的技术，可做到短木熟化灭菌快、燃料省、灭菌彻底的目的。短段木熟料接种，应严格按无菌操作进行，与袋料或瓶栽接种相同，要在无菌室或接种箱内接入灵芝菌种。

（二）发菌管理

1.加温萌发定植

灵芝菌丝生长最适温度26℃～28℃，该温度下菌丝很快长满断面，并向料内或段木内生长。

2．通气增氧降湿

一般在接菌后15天左右，袋壁附有大量水。当菌丝长满断面形成菌膜时，可微开袋口，适当通气增氧，待袋壁水珠消失再扎好。10天以后，第二次开袋，连续开3～4次，菌丝即能生长健壮、迅速，成品率可达98%，若袋内积水，可用消过毒的注射器把水抽出，然后用胶布封口。

3.室内消毒防杂菌

在每次开袋通气增氧前，用微型喷雾器交替喷高浓度的保美生、甲基托布津或多菌灵溶液，以对培养室空间进行消毒，防止开袋时杂菌侵入。为防止杂菌繁殖，培养室内空气湿度不得高于70%，因此要经常开窗通风，发现菌材有零星绿霉，可撒石灰粉，或喷保美生700倍液或0.1%多菌灵溶液，连喷2～3次，即可收到良好的效果。

（三）出芝管理

在灵芝菌丝长到1/3～1/2袋或瓶时，及时移入已整理好并消过毒的畦床或培养室内，同时脱去塑料袋。此时畦内或培养室内温度应控制在26℃～28℃，温差不宜过大。

1.光照

灵芝向光，在出芝管理期间，芝盖正常生长与光线有很大关系，要三分阳七分阴，最好有一定的光源。

2.湿度

原基形成以后，湿度要保持在85%～90%，若过高，要进行通风，以降低湿度。过低则要喷水。喷水的原则是：勤喷，少喷，喷匀；晴天多喷，阴天少喷，雨天不喷。如喷水不当或次数频繁，会造成芝盖再分化。

3.氧气

灵芝好气性强，在整个生长发育阶段都需要充足的氧气。为此，在管理上既要保温保湿又要通风透气，特别在原基形成期间，如遇高温通风不好，会导致大量畸形灵芝形成。因此，在盖膜时要为通风提供方便。

四、病虫害防治

灵芝主要病害有木霉、青霉、根霉等。一般由于灭菌不彻底、棉塞潮湿失去滤菌作用、接种时空气中带菌、培养环境不卫生引起。因此，灭菌彻底和无菌作业是高产栽培灵芝的关键。灵芝主要虫害有尺蠖、菌蝇等。尺蠖在子实体阶段大量发生，危害子实层及菌盖四周幼嫩的生长区。菌蝇幼虫破坏菌丝，蚕食子实层。生产中可悬挂敌敌畏棉球驱杀尺蠖，菌蝇幼虫可进行人工捕捉。

思考与练习

1.简述灵芝菌种分离的方法。

2.灵芝培养料的配方主要有哪些？

3.简述灵芝菌种制备的步骤。