甘蔗温水脱毒种苗生产

二、甘蔗温水脱毒种苗生产

1.样品采集及检测

调查不同生态蔗区甘蔗主栽品种和新品种宿根矮化病、花叶病等的发生和分布情况并采集样品。采样于甘蔗成熟期，选择具有代表性的主栽或主推品种。根据品种、植期分类，随机取样。每个样本取6～10条蔗茎，先用剪刀取幼嫩叶片装入样品采集袋，每条蔗茎再截取中下部茎节，用砍刀切成7cm左右长，再用钳子挤压25mL左右的甘蔗汁于50mL离心管内混匀（每取一个样品后均用70%的酒精消毒砍刀和钳子），放于－20℃冰箱保存待用。利用植物病原电镜（EM）、血清（ELISA）及PCR等检测技术对采集样品进行甘蔗宿根矮化病和甘蔗花叶病病原检测。根据调查检测结果，全面分析评估，明确甘蔗宿根矮化病菌、花叶病毒等的致病性及差异、田间发生分布及流行动态和不同品种发病情况，为应用推广甘蔗温水脱毒种苗提供科学依据。

2.甘蔗种苗温水脱毒处理

为保证温水处理甘蔗种苗的发芽率，应仔细选择生长健壮的成熟中下部蔗茎，先去除蔗叶避免阻塞水流循环系统，再将甘蔗种苗砍成带有2～3个芽段，然后将砍好的甘蔗种苗装入网袋堆放于处理吊篮内。在流动冷水中浸泡48小时之后，采用甘蔗温水处理设备进行温水（50±0.2℃）脱毒处理2小时，计时从甘蔗种苗放入处理池开始。如果处理超过2小时意味着发芽率的降低，保持处理温度在（50±0.2℃）对脱除病毒和发芽率都是必要的。

处理时首先将处理池水温加热到51～52℃，放入装有甘蔗种苗的吊篮，使其完全浸没。装有甘蔗种苗的吊篮放入处理池时，池内温度下降很快回到50℃。温度自控器实时监测池内温度并反馈信号给加热器以确保池温在50±0.2℃。巡检仪监测池内上、中、下部各层的温差。

甘蔗种苗从处理池吊出后，先喷洒冷水尽快冷至环境温度，再用50%多菌灵800倍液浸种5～10分钟以避免胚芽腐烂。处理后的甘蔗种苗芽胚质软应尽量避免触碰，甘蔗种苗冷却后可立即种植，也可摆放1～2天等胚芽硬化后种植。

甘蔗温水脱毒首先要有符合先进技术标准的温水处理设备（能够保持水体循环、温度自控50±0.2℃）和相应的脱毒方法、工艺流程等，否则水温过高、处理时间过长易使种芽烫伤失去发芽能力，水温过低、处理时间过短起不到脱毒效果；其次，为确保脱毒种苗的发芽率，应选择生长健壮的成熟蔗茎中下部茎段处理，处理后的脱毒种苗先喷洒杀菌剂（多菌灵）以避免胚芽腐烂，再摆放1～2天等胚芽硬化后种植。