（一）实验目的
细胞转染技术是将纯化的含有靶基因的质粒DNA送入细胞内，并在细胞内表达。转染方法有多种，根据不同的细胞，贴壁或悬浮细胞可选用不同的方法，目的是要达到较高的转染效率。这里主要介绍细胞脂质体转染方法。
（二）实验试剂
1.pcDNA3.1-GFP-C3质粒。
2.无血清无双抗RPMI1640培养液，含10%FBS的RPMI1640培养液。
3.小鼠条件永生化足细胞系（MPC5）。
4.Lipofectamine2000试剂盒。
5.G418抗生素。
（三）实验流程
1.MPC5用含10%FBS，100U/ml青霉素，100U/ml链霉素的RPMI1640培养液传代培养，培养条件为37℃，5%CO2。细胞生长至70%～80%融合后进行传代。
2.转染前24h将对数生长期的MPC5细胞（细胞悬液浓度为1×105/ml）接种于25cm×25cm的组织培养瓶中，待细胞长至60%融合。
3.转染前1h更换新鲜培养液，4ml/瓶，继续培养。
4.将pcDNA3.1-GFP-C3质粒8μg加入无血清无双抗（不含青、链霉素）RPMI1640培养液中（总体积为500μl），轻轻混匀，室温放置5min。
5.Lipofectamine2000试剂20μl加入无血清无双抗1640培养液中（总体积为500μl），轻轻混匀，室温放置5min。
6.配制转染工作液 将稀释的Lipofectamine液逐滴加入稀释的质粒溶液中，轻轻混匀，室温放置15min。
7.吸去培养瓶中的原培养液，无血清无双抗1640培养液洗细胞一次，加入无血清无双抗1640培养液4ml。
8.将转染工作液轻轻混匀，逐滴加入4ml培养液中，轻轻混匀，继续培养。
9.5～6h或以后更换新鲜的完全的培养液。
10.荧光显微镜检测转染效率，见图1-14。
（四）注意事项
1.转染成功与否，相关因素很多，质粒纯度十分关键。
2.细胞状态的好坏尤为重要，最好是传代后12～24h转染。
3.如果想要得到单克隆的细胞，就要挑克隆（转染24h后加入适当浓度的G418进行筛选。每2～3d换一次液，等细胞长成单克隆后，挑取单克隆，扩增培养，用100μg/ml G418维持筛选）；或按不同密度把转染的细胞种植到96孔里，直到一个孔一个细胞，由一个细胞长起来的克隆，再经过传代，鉴定，即可永久保存。
图1-14 转染pcDNA3.1-GFP-C3的足细胞，共聚焦显微镜下形态（×600）
[1]林洪丽，陈香美，傅博，等.正、反义组织金属蛋白酶抑制剂1基因转染对肾小球系膜细胞凋亡及相关基因表达的影响.中华医学杂志，2001,81:411-414.
[2]袁莉，付博，陈香美，等.三种基因转导方法在不同代龄复制性衰老细胞中的比较研究.中国生物化学与分子生物学报，2004,20(2):257-263.
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