（一）优球蛋白溶解时间测定
【原理】 血浆优球蛋白组分中含有纤维蛋白原、纤溶酶原和纤溶酶原激活剂等。将受检血浆置于醋酸溶液中，使优球蛋白沉淀，经离心除去纤溶抑制物后，将沉淀的优球蛋白溶于缓冲液中，再加入适量钙溶液（加钙法）或凝血酶溶液（加酶法），使纤维蛋白原转变成纤维蛋白而凝固，同时形成的纤维蛋白辅助其中的纤溶酶原激活剂激活纤溶酶原，在37℃下观察凝块完全溶解所需时间，即为优球蛋白溶解时间（euglobulin lysis time，ELT）。
【试剂】
1.0.109mol/L枸橼酸钠溶液。
2.0.025mol/l氯化钙溶液。
3.凝血酶溶液（2U/ml）。
4.10g/L稀醋酸溶液。
5.硼酸盐缓冲液（pH 9.0）取氯化钠9g，硼酸钠1g，加蒸馏水至1 000ml。
【操作方法】
1.在1支尖底离心管内加蒸馏水7.5ml和10g/L醋酸溶液0.12ml，使pH为4.5。置冰浴中。
2.取被检者枸橼酸钠1:9抗凝的新鲜血浆0.5ml，加人上述尖底离心管中，置冰浴中10min，使优球蛋白充分析出。3 000r/min离心5min。
3.倾去上清，倒置在滤纸上，吸去残存液体，加硼酸盐缓冲液0.5ml，用小玻棒轻轻搅拌，使沉淀完全溶解。
4.加0.025mol/L氯化钙溶液（加钙法）或2U/ml的凝血酶溶液（加酶法）0.5ml，置37℃水浴中，当凝块形成时开始计时，再观察凝块完全溶解所需的时间。
【参考值】 加钙法：130±41min；
加酶法：157.5±59min。
【临床意义】 ELT检测纤溶活性增强常用的筛选试验，具有一定的特意性和准确性，但敏感性较差。
1.ELT缩短（小于70min） 表明纤溶活性增强，见于原发性或继发性纤溶亢进。
2.ELT延长 表明纤溶活性减低，见于血栓前状态和血栓栓塞性疾病。
（二）纤维蛋白（原）降解产物（FDPs）检测
【原理】 胶乳凝集法：以抗纤维蛋白（原）降解产物（FDP）特异性抗体标记乳胶颗粒，后者与待测标本（血清、尿液或血浆）混合。当样品FDP含量大于一定浓度（血清或尿液大于2μg/ml，血浆大于2.5μg/ml）时，标记的胶乳颗粒则发生凝集，呈现阳性反应。方法学略。
【参考值】 血清FDP含量＜10μg/ml（阴性）；
尿液FDP含量＜2μg/ml（阴性）；
血浆FDP含量＜5μg/ml（阴性）。
【临床意义】 纤维蛋白（原）降解产物（FDP）检测主要反映是否存在纤溶亢进的临床现象或疾病。阳性或增高见于：①血栓性疾病；②原发和继发性纤溶、（DIC）；③恶性疾病、肝病、肾病、器官移植等；④肝素、异常纤维蛋白原血症、类风湿因子可使FDP假性增高。
【注意事项】
1.采血及配制醋酸溶液要在15min内完成。
2.观察溶解标本以不见絮状物为准。
3.当纤溶活性极度增强时，体内纤溶酶原严重消耗，此时可出现假阳性。
（三）D-二聚体的检测
【原理】 胶体金方法检测D-二聚体（D-dimer）基于免疫过滤试验原理，将血浆加入检测卡孔内，样品被吸入，D-dimer分子被吸附到包被D-dimer单克隆抗体的膜中，然后加入D-dimer单克隆抗体与胶体金偶联物溶液，膜中D-dimer将与抗体金偶联物发生结合反应，形成三明治嵌合体，过剩偶联物用洗涤液洗去。样本中存在病理水平的D-dimer，检测膜显现微红色，颜色的深浅与样本中D-dimer的浓度成正比。色泽强度可用比色卡进行对比评价，也可用读数仪（NycoCard-READER）进行读数。
【试剂和仪器】
1.检测卡包装在铝箔袋内。
每卡有6个检测孔，孔内的渗水膜包被D-dimer单克隆抗体。卡已经过处理，允许使用记号笔在孔下的空白处对病人和（或）标本的属性进行标记。
2.偶联抗体反应液R1D-dimer单克隆抗体与胶体金偶联物溶液3ml。
3.洗涤液R2 12ml pH8.0的缓冲液，主要成分为小牛血清白蛋白及清洗剂。
4.阳性质控品纤维蛋白的降解产物与小牛血清白蛋白的缓冲液及稳定剂1ml。
5.判读比色卡1个塑料比色卡，5个颜色逐深的孔分别代表0.3～8mg/L的5个水平D-dimer的浓度，用于判读检测结果。
6.50μl的吸嘴1个。
【操作方法】
1.采血 取静脉血2～3ml，加抗凝剂（0.11M枸橼酸钠），比例为9:1（血:抗凝剂），然后在6h内2 000r/min离心15min。
2.预清洗 吸取50μl洗涤液R2加入反应孔内，使洗涤液浸润反应卡，注意勿使加样器触及反应孔膜。
3.加样 向反应孔加入50μl未稀释的枸橼酸盐抗凝的无血小板血浆标本或质控品，样品应在45s内渗入卡内。
4.加偶联液 向反应孔加入50μl隅联液R1，加入前须将偶联物瓶颠倒两次使其混匀。偶联液应在45s内渗入卡内。
5.用加样器吸取50μl洗涤液R2加入反应孔中。并保持反应孔周围清洁，可用吸水纸吸拭。
6.使用比色卡判读结果将比色窗置于反应孔上对比相近颜色而获得结果，五个浓度颜色相当于如下血浆D-dimer浓度：①0.3mg/L；②1mg/L；③2mg/L；④4mg/L；⑤8mg/L。
报告结果可按最接近样品颜色的比色窗值报告。若样品颜色正介于二色窗之间，也可按二浓度的平均值报告。检测结果以mg/L表示。
【参考值】 正常人的含量低于0.3mg/L。
【临床意义】 纤维蛋白降解产物D-dimer的水平高于0.3mg/L，视为病理状态，表明体内存在着频繁的纤维蛋白降解过程。因此，纤维蛋白降解产物D-dimer是深静脉血栓（DVT），肺栓塞（PE），弥散性血管内凝血（DIC）的关键指标。
【注意事项】
1.离心后的标本，一定要用吸管小心吸出，不可用倾倒血浆法获得标本，以免血细胞等成分加入影响检测结果。
2.血样标本须在6h内分离血浆，最好立即分离血浆。
3.血浆标本须在24h内进行测定。
4.温度可影响实验结果。试剂与样本需平衡至20～25℃再进行检测。
（中国医科大学 佟广辉 刘 勇）
免责声明：以上内容源自网络，版权归原作者所有，如有侵犯您的原创版权请告知，我们将尽快删除相关内容。
