项目5．4 中级食品检验工微生物检测技能操作考试
食品检验工微生物检测技能操作考试模拟试卷（中级）
准考证号码姓名单位得分
试题：饮料中细菌总数的测定（100分）
一、说明
（1）本试卷满分100；中级食品检验工技能操作考试，微生物检测技能操作考试占50%，理化检测技能操作考试占50%。
（2）考核成绩为操作过程评分、测定结果评分和考核时间评分之和。
（3）完成时间90min（培养时间除外），一般要求操作过程60min，结果处理30min；全部操作过程时间和结果处理时间计入时间限额。
二、操作步骤
1．检验稀释和培养
（1）以无菌操作，将检样（果汁饮料）25mL移入含有225mL灭菌生理盐水的广口瓶内（瓶内置有少量的玻璃珠），经充分振摇成1∶10的均匀稀释液。
（2）用1．0mL灭菌吸管吸取1∶10的均匀稀释液1．0mL，沿管壁缓缓注入含有9．0 mL灭菌生理盐水的试管内（注意吸管尖端不要触及管内液面），振摇试管混合均匀，制成1∶100的稀释液。
（3）另取1．0mL灭菌吸管，按上述操作递增稀释，如此每递增稀释一次，即换1支1．0mL灭菌吸管。
（4）按食品卫生要求或对标本污染程度的估计，选择2～3个适宜稀释度，分别作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1．0mL稀释液于灭菌培养皿内，每个稀释度作2个培养皿。
（5）稀释液移于培养皿后应及时将凉至46℃营养琼脂（可放于（46±1）℃水浴保温）注入培养皿约15mL，并转动培养皿使混合均匀。同时将营养琼脂培养基倾入加有1．0mL灭菌生理盐水的培养皿内作空白对照。
（6）待琼脂凝固后，翻转培养皿，置（36±1）℃恒温培养箱内培养（24±2）h取出，计算培养皿内菌落数，即得1mL果汁饮料所含菌落总数。
2．菌落计数方法
（1）先计算相同稀释度的平均菌落数，若其中一个培养皿有较大片状菌苔生长时，则不应采用，而应以无菌苔生长的培养皿作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌苔的大小不到培养皿的一半，而其余的一半菌落分布又很均匀时，则可将此一半的菌落数乘以2代表全培养皿的菌落数，然后再计算该稀释度的平均菌落数。
（2）首先选择平均菌落数在30～300之间的，当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则以该平均菌落数乘以其稀释倍数即为该水样的细菌总数。
（3）若有2个稀释度的平均菌落数均在30～300之间，则按二者菌落总数之比值来决定。若其比值小于2，应采取二者的平均数。若大于2，则取其中较小的菌落总数。
（4）若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则以稀释度最高的平均菌落总数乘以稀释倍数。
（5）若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则以稀释度最低的平均菌落总数乘以稀释倍数。
（6）若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，则以最接近30或300的平均菌落总数乘以稀释倍数。
三、数据记录
（1）作培养皿内菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板的平均菌落总数。
（2）将各稀释平板上的菌落数填入下表：
四、结果计算
根据实验结果，报告检测结果：1mL饮料中的细菌数是_______。
食品检验工微生物检测技能操作考试模拟试卷评分记录表（中级）
续表
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