猫爪草提取物安全性毒理学研究

本研究采用小鼠急性经口毒性试验、Ames试验、骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、90d喂养实验对猫爪草提取物安全性毒理学进行了研究。结果：经口急性毒性试验表明，MTD＞20．0g／kg；Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核和小鼠精子畸形试验结果阴性；90d喂养实验中体重增加和食物利用率、血液学指标值无异常，生化指标值在正常值范围内，未见大鼠主要脏器组织出现有意义的病理学改变，提示猫爪草提取物无明显的毒副作用。

（一）材料

1．受试物　猫爪草提取物（自制，人体推荐剂量为0．027g／kg）。实验时，以水为溶剂配制成各实验所需浓度。

2．实验动物及环境　SPF级昆明种小鼠、SD大鼠及饲料，实验动物生产许可证号为SCXK（鲁）2009－0012。实验动物使用许可证号为SYXK（鲁）2005－0001。

（二）方法

1．急性毒性试验　选用SPF级昆明鼠20只，体重18．0～22．0g，雌雄各半。实验采用最大耐受剂量法。首次灌胃种小前禁食16h，自由饮水，24h内间隔4h2次经口灌胃体积均为0．2ml／10g，累计剂量为20．0g／kg，给予受试物。连续观察14d，记录动物中毒症状及死亡情况。

2．Ames试验　采用经鉴定符合要求的鼠伤寒沙门菌组氨酸缺陷型TA97，TA98，TA100，TA102　4株菌株进行试验。采用多氯联苯（PCB）诱导的大鼠肝微粒体酶（S－9）作为体外代谢活化系统。试验设5个剂量分别为每皿5　000μg，1　000μg，200μg，40．8μg，同时设自发回变、溶剂对照和阳性突变剂对照。

3．小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验　选用SPF级昆明种小鼠50只，体重25．0～30．0g，随机分成5组，每组10只，雌雄各半。受试物剂量组各剂量分别为10　000mg／kg，5　000mg／kg和2500mg／kg，另设一个溶剂对照组和一个阳性物环磷酰胺对照组。30h2次灌胃，于末次染毒6h后处死动物，取胸骨骨髓用小牛血清稀释涂片、固定和染色。每只小鼠计数1　000个嗜多染红细胞（PCE），记录微核细胞数，同时计数观察每200个嗜染红细胞，计算嗜多染红细胞与成熟红细胞的比值。

4．小鼠精子畸形试验　选用SPF级雄性昆明种小鼠25只，体重25．0～35．0g，随机分成5组，每组5只。受试物实验组剂量分别为10　000mg／kg，5　000mg／kg和2　500mg／kg，同时设阴性组和阳性物环磷酰胺对照组各1个。连续5d经口灌胃，至第35天处死动物，取附睾常规制片，甲醇固定，伊红染色。每只小鼠计数1　000个精子，计算畸变精子发生率。

5．大鼠90d喂养实验　选用SPF级SD大白鼠80只，体重60～90g。将实验动物随机分为4组，即对照组及低、中、高3个受试物组，每组20只，雌雄各半，单笼喂养。采用将样品掺入饲料中给样。低、中、高剂量分别按2．5%，5．0%，10．0%的比例将样品掺入相应饲料中，并保证各组饲料蛋白质含量均衡。按体重的8%折算饲料的摄入量，低、中、高剂量组相当于2．0g／kg，4．0g／kg，8．0g／kg。对照组动物喂饲基础饲料，自由饮食饮水。记录动物的一般表现、体重、食物利用率。进行血常规、血红蛋白、红细胞计数、白细胞总数及其分类、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素氮、肌酐、总胆固醇、三酰甘油、血糖、总蛋白、白蛋白等指标的分析。同时对动物脏器进行大体检查，计算脏体比值，并对肝、肾、脾、胃及肠、睾丸或卵巢等进行病理组织观察。

6．统计分析　实验数据统计用Excel，SPSS　11．5软件进行统计分析。

（三）结果

1．猫爪草提取物对小鼠急性毒性、遗传毒性的影响　猫爪草提取物对雌、雄性昆明种小鼠的经口急性毒性最大耐受剂量（MTD）均＞20．0g／kg，动物活动正常，未发现中毒症状及死亡情况。小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、Ames试验等结果均为阴性。

2．猫爪草提取物对大鼠体重增长、进食量、食物利用率的影响　各剂量组雌、雄大鼠体重增长情况良好，其体重、增重、进食量及食物利用率与溶剂对照组比较，差异均无统计学意义（P＞0．05）。见表4－54。

表4－54　猫爪草提取物对大鼠体重、食物总摄入量及食物利用率的影响±S）

3．猫爪草提取物对大鼠血常规的影响　见表4－55。各剂量组雌、雄大鼠的血红蛋白、红细胞总数、白细胞总数与对照组比较，差异无统计学意义（P＞0．05）。

表4－55　猫爪草提取物90d喂养对大鼠血液学检查结果－S）

4．猫爪草提取物对大鼠血生化的影响　见表4－56。各剂量组雌、雄大鼠的各项生化指标与对照组比较，差异无统计学意义（P＞0．05）。

表4-56猫爪草提取物%&’喂养对大鼠生化检验结果х±s

5．猫爪草提取物对大鼠脏器重量、脏器／体重比值的影响　见表4－57，表4－58。各剂量组雌、雄大鼠的脏器重量、脏器／体重比值与对照组比较，差异无统计学意义（P＞0．05）。

表4－57　猫爪草提取物90d喂养对大鼠脏器重量的影响（x－±S）

表4－58　猫爪草提取物90d喂养对大鼠脏体比的影响（±S）

6．大体解剖及组织学检查结果　大体解剖，各脏器色泽、大小及质地均未见明显异常。雌、雄大鼠各剂量组和对照组的肝、肾、脾、胃、小肠、睾丸、卵巢等均未见有意义的病理学改变。

本文按《食品安全性毒理学评价程序》（2003年版）中检验方法对猫爪草的安全性进行了实验研究。急性经口毒性试验是毒理学安全性评价最基础的试验，主要研究24h内单次或多次经口染毒后动物所产生的毒性反应和死亡情况。其主要目的是求出受试物对实验动物的半数致死量（LD50）；初步估测毒作用的靶器官和作用机制，为亚慢性、慢性和其他毒性实验提供参考和依据。本研究的小鼠急性经口毒性试验采用最大耐受剂量法，结果提示猫爪草提取物对小鼠的最大耐受剂量（MTD）＞20．0g／kg，属无毒级。遗传毒性试验是针对遗传物质作用终点的不同，Ames试验是从原核细胞水平检测受试物是否具有诱发基因突变能力，它是一种快速检测化学物质致突变以及潜在致癌的常用方法。本试验猫爪草提取物对TA97，TA98，TA100，TA102　4株试验菌株，未见致突变作用。微核试验主要是对染色体结构完整性改变进行评估。本研究表明该受试物3个剂量组的微核率与阴性对照组比较差异无统计学意义，而与环磷酰胺组比较差异有统计学意义，试验结果表明，没有发现受试物猫爪草提取物具有诱发小鼠骨髓嗜多染红细胞微核生成能力。精子畸形实验是通过观察接触化学物质一段时间，小鼠精子形态的改变，以研究外来化学物对人或动物精子细胞的毒性作用。本实验小鼠精子畸形实验中的3个剂量组与阴性对照组比较差异无统计学意义。而与环磷酰胺组比较差异有统计学意义，说明在实验剂量范围内对精子的生成、发育无影响。90d喂养实验是慢性毒性预试阶段，可摸索慢性实验的观察点也为剂量设计和动物物种选择提供资料。在本试验条件下，3个剂量组的猫爪草提取物对大鼠灌胃90d后，其对实验大鼠的生长发育、血液学、血液生化学、脏器重量和脏器／体重比值与对照组比较差异均无统计学意义（P＞0．05）。病理学等方面各项相关指标的检验均未见大鼠主要脏器组织出现有意义的病理学改变。以上说明猫爪草提取物在本实验条件下未见明显毒性，未见遗传毒性作用。由此可见，猫爪草提取物作用于实验动物具有一定的安全性，值得进一步研究开发利用。本研究为其开发成为功能食品的原料提供了安全性的毒理学试验依据。