液－液分配色谱

分配色谱法(partition chromatography)是20世纪40年代由Martin和Synge提出的，该方法将液体均匀地涂渍在惰性物质(载体，也称作担体)表面上作为固定相，利用被分离组分在固定相与流动相中的溶解度差异所造成的分配系数差别而被分离，由于该种方法的固定相实际上也是液体，因此也称作液－液分配色谱(liquid－liquid chromatography，LLC)。分配色谱法中分配系数的计算如下。

上述公式中Cs为溶质分子在固定相中的浓度，Cm为溶质分子在流动相中的浓度，Vs为固定相的体积，Vm为流动相的体积。分配系数K与待测组分性质、流动相性质、固定相性质及柱温有关。

根据固定相液体与流动相液体相对极性的差别，分配色谱法又可分为正相分配色谱和反相分配色谱。当固定相极性大于流动相极性时，称为正相分配色谱(或正相色谱，normal phase chromatography)，该类色谱中通常选择水、各种缓冲溶液、稀硫酸、甲醇、甲酰胺、丙二醇等强极性溶液或混合溶液与载体(担体)混匀后作为固定相，此时被分离组分中极性大的亲水性成分移动慢，后出峰。当固定相极性小于流动相极性时，称为反相分配色谱(或反相色谱，reversed phase chromatography)。反相色谱中常用硅油、液体石蜡等极性较小的有机溶剂作为固定液，而水、水溶液或与水混合的有机溶剂作为流动相，此时极性大的组分先流出，而极性小的组分后流出。

在分配色谱中，载体(担体)仅承担负载固定相液体的作用，因此通常选用颗粒大小均匀、自身无吸附能力且能吸留较大量固定相液体的惰性物质作为担体。通常选取硅胶、硅藻土、纤维素、淀粉、微孔聚乙烯粉等作为分配色谱的担体。由于可涂渍的固定液种类繁多，因此分配色谱法能分离水溶性及油溶性等多种类型的生物样品，并具有色谱柱再生方便、样品负载量高、分离效果好、重现性好等优点。但由于固定液在流动相中会产生微量溶解从而造成固定液流失，并污染流动相中被分离的组分，因此限制了分配色谱的使用。