【摘要】：原位PCR技术在遗传学、微生物学、病理学、组织胚胎学和免疫学等领域的应用越来越多,对内源性和外源性基因均能检测。原位PCR技术是一项正在发展的新技术,诸多因素可导致假阳性、假阴性结果出现;操作流程复杂,较液相PCR扩增效率低,石蜡组织切片假阴性率高等诸多问题均亟待在今后的实践中逐一解决。
原位PCR技术在遗传学、微生物学、病理学、组织胚胎学和免疫学等领域的应用越来越多,对内源性和外源性基因均能检测。
(一)内源性基因检测
原位PCR具有既定位又敏感的特点,对于一些只有单个或几个拷贝的低表达固有基因,只有用它,才能在组织细胞原位检测到;对于点突变、基因重排、染色体易位或转位等基因改变也可用它检测,由此获得疾病特异性DNA、RNA序列信息及明确其发生的组织、细胞,为遗传性疾病的发现与研究提供有用信息。
(二)外源性基因检测
原位PCR高度敏感性、特异性及定位性的优点,使之成为临床诊断某些病毒、细菌、支原体等感染性疾病的重要手段,现已用于HBV、HCV、HIV、HPV、HSV等病毒性疾病的病原学检测和治疗方案决策。另外,它也是检测转基因细胞、转基因动物或接受基因治疗等情况下宿主体内外来基因的重要手段。
原位PCR技术是一项正在发展的新技术,诸多因素可导致假阳性、假阴性结果出现;操作流程复杂,较液相PCR扩增效率低,石蜡组织切片假阴性率高等诸多问题均亟待在今后的实践中逐一解决。另外,该技术所需特殊设备(原位PCR仪)的昂贵价格也很大程度地限制了它的使用范围。相信,随着生物医学研究水平的进一步提高,临床工作者对疾病本质认识的进一步加深,检测技术的进一步更新以及技术本身应用潜质的进一步显现,该技术一定会成为病理检验的新的重要手段。
(李 梅 吕伟朋)
思考题
1.简述核酸原位杂交的基本实验程序。
2.荧光原位杂交实验操作中应注意哪些问题?
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