超薄切片样本制备成功后即可用于透射电镜观察。基本操作程序如下。
(一)开机启动
接通总电源,开启稳压电源(220V),开启冷却水循环装置(一般设定为20℃),打开电镜主机电源和控制电脑,仪器即自动抽真空,约30min后,高真空指示灯变亮,显示“READY”,即处于待用状态。
(二)样品安装
首先将样品杆拉出至样品室,关闭镜筒与样品室间的真空隔离栅,打开样品室并将样品杆拉出,再将样品载网装到样品杆上,然后将装好样品载网的样品杆推回样品室。关闭样品室门,并用手压紧,进行样品室抽真空,待样品室门被吸住后再松手。样品室进入真空状态后打开镜筒与样品室间的真空隔离栅,将样品推入镜筒,再抽整机真空。全过程均应保持镜筒真空,更换样品时要关闭灯丝电流。
(三)图像观察
1.再次确定仪器处于高真空状态后,接通镜筒电源,给电子枪和透镜供电,由低至高给电子枪加高压,至达到所需值。
2.加灯丝电流,当束流调到所需值后,即可观看图像。
3.用控制面板上的放大倍率旋钮选择放大倍数,聚焦旋钮聚焦图像,亮度旋钮调节亮度。
电镜观察和光镜不同,往往由于放大倍数高,而使各部分相互关系难以分清,一些结构难以确定。为了准确快速地寻找到样品中的有价值部分,应采用先低倍低压,后高倍高压的顺序观察,同时充分利用CRT屏上的位置指示器,缩短寻找样品的时间,减少样品受照射量,避免样品因过度照射受热形变。
(四)照相
照相前调好电压对中、电流对中、亮度对中和消像散,使物镜光栅孔与中心透镜斑点同心。为获得高质量的照片,要选择亮度均匀区域作为拍摄对象,尽可能使图像充满拍摄区域,并把主要观察对象放在荧光屏中心。移开荧光屏,使置于荧光屏下的照相底片曝光成像。再经冲洗,即可得到一幅所需照片(图7-1,彩图6)。摄像时应将视窗关闭。底片盒更换应保持镜筒真空(方法同样品更换)。目前很多电镜摄像系统已由计算机系统代替了传统的底片曝光摄像系统,这使电镜观察和摄取图像更为方便,也可得到更多信息。
(五)关机
依次关闭灯丝电流、高压、镜筒电源、真空电源,30min后,再关闭冷却水循环装置、稳压电源、总电源。
(六)记录
在记录本上记录电镜使用情况及被拍照组织名称与编号。
图7-1 透射电镜人肝细胞(20 000×)
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