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腺病毒抗体阴性是什么意思

时间:2022-04-17 理论教育 版权反馈
【摘要】:ELISA检测腺病毒法敏感性高,且方便、简易、可靠,易于操作,3~4小时即可得出结果,因此适合制成试剂盒普遍应用于临床。但是由于腺病毒相关血清型之间存在着交叉反应,而且可能会与其他相关病原存在交叉反应,因此有时ELISA法检测腺病毒抗体可能会出现假阳性的结果。质控血清检测结果成立。小于阴性指标OD值为阴性,大于阳性指标OD值为阳性。

检测腺病毒常用的血清学方法包括IF、CF、EIA、HI及NT等试验,采取患者急性期和恢复期双份血清进行检测,若恢复期血清抗体效价比急性期增长4倍或以上,即有诊断意义,快速检测血清可用ELISA法或乳胶凝集试验。

ELISA检测腺病毒法敏感性高,且方便、简易、可靠,易于操作,3~4小时即可得出结果,因此适合制成试剂盒普遍应用于临床。但是由于腺病毒相关血清型之间存在着交叉反应,而且可能会与其他相关病原存在交叉反应,因此有时ELISA法检测腺病毒抗体可能会出现假阳性的结果。

4.2.1 检测原理

将抗原物理性地吸附在固相载体上,加患者血清到板孔中,其所含的抗体特异性地与固相载体中存在的抗原结合,形成免疫复合物。洗板除去多余物质,加入酶标记的抗IgA、IgM或IgG抗体,通过共价键生成抗原-待测抗体-酶标记抗体复合物,此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性;加入底物(对硝基苯磷酸盐)反应生成有色产物,颜色反应的强度与标本中相应抗体的量呈正比例。

4.2.2 检测过程

在进行检测前,先准备试剂盒、水浴箱、移液器、酶标仪、双蒸水去离子水、吸水纸、取样吸头和计时器等所需材料。

具体检测步骤为:将所有试剂置于室温0.5小时;按试剂盒要求稀释血清;将检测所需数目的微孔条放在微孔板框上,并准备好原始记录单;分别加入已稀释样本或对照血清100μl/孔,留一孔作底物空白对照。将样本于37℃湿盒内孵育1小时;缓冲洗液洗涤板孔4次;加入IgA/IgM/IgG酶标记抗体100μl/孔(空白孔除外),37℃湿盒内孵育30分钟;洗涤板孔后,加入底物溶液100μl/孔(包括空白孔),37℃湿盒内孵育30分钟;加终止液100μl/孔。60分钟内,用酶标仪在450nm波长处以空白孔调零,逐孔测定吸光度(A)值。

4.2.3 结果判定

底物空白的A值须<0.25,试剂盒中阴性、阳性对照和空白对照须成立。质控血清检测结果成立。标准血清的平均A值必须在有效范围内,此范围已在试剂盒专用的《质量控制证书》中给定(减去底物空白之后)。

取阳性对照平均OD值后,阳性对照OD值平均值乘以《质量控制证书》上给出的上、下限系数,即可得到阳性指标和阴性OD值判定范围。小于阴性指标OD值为阴性,大于阳性指标OD值为阳性。大于阴性指标OD值、小于阳性指标OD值范围区间为临界值。

4.2.4 临床意义

IgA或IgM阳性则表示受检者近期受到相关腺病毒感染;如果为阴性或在临界值范围内则不能排除感染的存在;如果间隔8~10天再取样检测,发现IgG抗体浓度显著提高(如增加4倍),则可认为是急性腺病毒感染。

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