β-羟丁酸测定

β-羟丁酸（β-hydroxybutyrate，β-HB）、乙酰乙酸（acetoacetate）和丙酮（acetone）统称为酮体（ketone bodies），正常人血酮体中β-羟丁酸约占78%，乙酰乙酸约占20%，丙酮约占2%。酮体是脂肪酸在肝的代谢产物。生理情况下，脂肪酸β氧化生成乙酰辅酶A（CoA），大部分乙酰辅酶A与草酰乙酸进入三羧酸循环，产生CO2、水和能量；小部分乙酰CoA转化为非酯化脂肪酸或在肝中缩和为酮体，经血液运送至周围组织氧化生成CO2、H2O，并产生能量。糖尿病时葡萄糖不能被很好地利用，不能产生足够量的草酰乙酸把乙酰CoA带入三羧酸循环，而使脂肪分解增加以供能。此时脂肪分解代谢增加，产生非酯化脂肪酸和三酰甘油，非酯化脂肪酸经β氧化生成大量乙酰CoA，这些乙酰CoA在肝缩和成酮体，当酮体的量增加超过周围组织的氧化能力时引起酮血症。酮体中的乙酰乙酸和β-羟丁酸均为强酸物质，可使血中和尿中有机酸浓度增高，而且消耗体内碱储，引起糖尿病酮症酸中毒。在酮症酸中毒早期，β-羟丁酸可有明显升高，而乙酰乙酸没有明显变化，在酮症恢复期，β-羟丁酸迅速下降，而乙酰乙酸在一定时间内仍保持升高或下降缓慢，因此，测定β-羟丁酸对糖尿病酮症的诊断、治疗监测比以往检测乙酰乙酸更灵敏、更可靠。

目前实验室β-羟丁酸测定方法较少，主要采用β-羟丁酸脱氢酶法，此法采用血清标本，只适合在实验室中检测。POCT检测β-羟丁酸方法也有待建立更多的方法，便携式全自动多参数生化检测仪、干式生化床旁分析系统等均为POCT检测仪器，此类仪器适用于进行多个项目的小批量的检测，并可同时使用血清、血浆、全血样本进行测试。仪器小巧，可以短时间使用干电池，便于携带、数分钟即可出结果，适合医院、社区、门急诊等使用。

【检测原理】　以美国Elkhart GDS诊断公司的GDS STATSite分析仪为例（图9-2）。

图9-2　美国Elkhart GDS诊断公司的GDS STAT-Site分析系统

系统主机的主要组成部分如下：1．液晶显示屏；2．电源插孔；3．电池盖；4．RS232端口；5．测试模块；6．测试舱盖；7．测试卡；8．输入键；9．选择及控制键

STAT-Site系统是一套高精密度的反射光度仪。反射光度仪通过目标或试验区的发光并检测反射光的数量进行操作。该读数是基于试验区的颜色和发射光的波长。STAT-Site系统是以一只发光二极管（LED）作为测试光源。该系统是通过微处理器来控制的，可以自动的完成所有的数据处理并报告出结果，在液晶显示器上显示出来。常规使用时，系统通过一个交流变压器进行供电，如需要，也可以短时间的使用干电池。β-羟丁酸测定时，在pH8．5条件下，β-羟丁酸在β-羟丁酸脱氢酶的作用下生成NADH。生成的NADH和NBT（氧化型）在硫辛酰胺脱氢酶的作用下生成NAD＋和NBT（还原型），这一过程是一个颜色变化过程。

【适应证】

1．酮症酸中毒，如糖尿病、妊娠呕吐、长期饥饿等。

2．适用于各级医院不同科室及门急诊的快速检测。

【标本采集】　采集手指末梢血或静脉全血25μl，也可使用血清、血浆、全血样本进行测试。

【操作方法】　以STAT-Site为例。

1．打开仪器门，插入试验膜块。

2．选择全血或血清。假如样本是全血，按?ENTER?；假如样本是血清、血浆、质控材料或经稀释的全血，按?NEXT?显示血清，然后按?ENTER?。

3．插入试验卡。按照提示插入试验卡。完全插入后，确保试验卡已插入固定。在试验卡上放置两只手指（示指和中指），一边朝自己轻微地拉试验卡，一边往下推。当听到轻微的“咔嗒”声。屏幕将显示“CHECKING（正检查）”，然后加入样本。

4．加入样本，关上门。立即在试剂卡中央的试剂垫处加入静脉或末梢全血25μl，立刻关上门，2min测试完毕。加入的样本量不足，会出现“NOT ENOUGH SAMPLE”提示。应用新的试验卡重新检测。

5．在测试过程中不要打开门，否则试验将失败，并应重新测试。

6．观察、记录和确认结果。观察并记录结果。取出试验卡，检查试验卡的底部确认颜色的变化。假如颜色呈现不规则或花斑状，用新的试验卡重新测定。

【参考范围】　β-羟丁酸＜0．3mmol／L（建议每个实验室建立自己的正常参考范围）。

【临床意义】

1．据报道约有30%的糖尿病患者血β-羟丁酸有不同程度增高。而尿中酮体检查阳性率仅为18%左右，此报道提示血β-羟丁酸测定可以更早期和敏感地了解糖尿病患者酮体代谢异常情况，有利于糖尿病酮症的早期诊断与治疗监测。1型糖尿病患者发生酮症酸中毒的倾向较高，2型糖尿病较少。酮症酸中毒的早期血中β-羟丁酸明显升高，在灭酮治疗时，血β-羟丁酸的下降早于乙酰乙酸，因此可用于糖尿病灭酮治疗和疗效观察。

2．其他原因所致的β-羟丁酸增高。急性酒精中毒、妊娠剧吐、严重脱水、减肥、长期饥饿、营养不良、剧烈运动后或服用双胍类降糖药时可用以监测酮症的发生。

3．测定早晨空腹血β-羟丁酸水平，可了解严重损伤、急重病、败血症和营养支持的病人体内脂肪蛋白质动员情况。

4．生酮食品可诱发某些儿童癫，监测β-羟丁酸水平用以维持儿童癫的正确同源性饮食。某些先天性代谢病可测定β-羟丁酸帮助诊断。

【评价及注意点】

1．严重溶血可使β-羟丁酸浓度检测结果偏低，胆红素＞274μmol／L（16mg／dl）时，可使β-羟丁酸显著降低。脂血可使β-羟丁酸浓度稍微偏高。

2．病理情况时，酮体生成增高，超过组织的处理能力，使血、尿中酮体增多。血酮体中β-羟丁酸约占酮体总量的70%。而临床上一直沿用尿试条来检验尿酮体，尿酮体试条上含有的硝普钠与乙酰乙酸反应生成紫红色化合物，与丙酮的反应较差，与β-羟丁酸不发生反应。可使尿酮体检测出现假阴性，造成漏诊或误诊。而血中测定酮体的方法主要测定β-羟丁酸的含量，故血β-羟丁酸检测优于尿酮体试验。

3．检测之前仔细阅读仪器说明书，特别是质量控制、注意事项、系统维护的详细内容要充分了解，并按规定程序操作。

4．检测系统有完善的质量保证体系，有高低浓度的质控品。操作中应严格按仪器质控要求进行操作，并根据已建立的质量保证体系进行质控物分析。如果质控结果不在预期值范围，可参照仪器说明书使用检查卡1、2或系统检查试剂盒。测试卡可以用于确认STAT-Site系统的电子及光学系统是否正常。确认时应按检测卡使用检测程序进行检测。

5．干扰因素。在含0．8mmol／L浓度的β-羟丁酸标本中，下列浓度的物质对测试没有干扰：葡萄糖（2000mg／dl），肌酐（5mg／dl），尿酸（16mg／dl），胆红素（10mg／dl），乳酸（96mg／dl），维生素C（3mg／dl），乙酰乙酸（0．2mmol／L）及一些异常血药浓度的药物。血细胞比容在30%～56%时对测试没有影响。1mmol／L的二硫基丙醇可使β-羟丁酸的测试浓度降低35%。

【局限性】　标本如含有8mmol／L或更多的乙酰乙酸，而同时伴有8mmol／L或更少的羟丁酸时，β-羟丁酸的浓度会发生很明显的降低。DKA病人的样本就符合上述的情况。因此，推荐所有的样本在稀释后再进行测试。