血清雌二醇测定

1．检验目的

雌二醇（E2）是一种天然的雌激素，其水平有助于监测排卵的情况。检测血液中雌二醇变化对于临床分析性发育状况，无月经病因，不孕和绝经的成因具有重要参考价值。

2．检测原理

微粒子化学发光（竞争法）

AccessEstradiol测定是一种竞争结合酶免法测定。将样本添加到含包被着山羊抗兔：兔抗E2的顺磁性微粒和TRIS缓冲蛋白质溶液的反应管中。20 min后，再添加E2碱性磷酸酶结合物。样本中的E2与E2-碱性磷酸酶结合物争夺一定数量的特异性抗E2抗体上的结合位点。产生的抗原抗体复合物被固相上的捕获抗体所结合。在反应管内温育完成后，结合在固相上的物质将置于一个磁场内被吸住，而未结合的物质被冲洗除去。然后，将化学发光底物Lumi-Phos＊530添加到反应管内，然后由照度计对反应中所产生的光进行测量。所产生光的量与样本内E2的浓度成反比。样本内分析物量由所储存的多点校准曲线来确定。

3．仪器设备性能参数

见仪器设备相关使用说明书。

4．标本

4.1 单项：E2，组合项：性激素全套。不抗凝静脉血3～5 ml（红头管），编号，离心（3 000～4 000 r/min）3～5 min分离出血清，待测。离心后的血清不能含有颗粒物或微量纤维蛋白。

4.2 在室温（15～30℃）下于8 h内检测，不能立即测定的标本应离心后保存于2～8℃的冰箱，于2 d内检测。长期储存应分离出血清于-15～-20℃或更低温度的冰箱保存，避免反复冻融。

4.3 从冰箱里取出的样品检测前室温平衡30 min以上，冷冻样品实验前需混匀。

4.4 已完成测试的标本保持完整的识别号，置2～8℃冰箱内保存7 d。

5．设备和试剂

5.1 仪器设备　美国Beckman Coulter公司Unicel DXI 800 ACCESS全自动化学发光免疫分析仪。

5.2 试剂种类

5.2.1 检测试剂组成　美国Beckman Coulter公司DXI 800原装配套E2试剂、通用发光底物液、冲洗液。

5.2.2 试剂准备　新开试剂盒需在包装上注明开盒日期，在瓶上注明开瓶日期，液体试剂，即开即用，无须特殊准备，上机前避免过度振摇产生泡沫影响测试。

5.2.3 试剂盒的保存与有效期　未开启试剂保存于2～8℃冰箱，请勿冷冻，在有效期内均可使用。冲洗液可常温保存。未用完的试剂可直接放置于仪器内保存（带冷藏装置），也可取出放置于2～8℃冰箱保存，有效期为14 d。

6．容器和添加剂

血液标本采集的容器是不加抗凝剂的真空采血管。

7．校准步骤

7.1 校准品　Beckman Coulter公司DXI 800原装配套E2定标液、液体试剂，即开即用，无需特殊配制，放置于2～8℃冰箱保存，请勿冷冻，在有效期内使用。检测前室温平衡30 min以上。

7.2 量值溯源　见DXI 800使用说明书。

7.3 校准周期

7.3.1 不同批号试剂需分别定标，定标通过方可使用。

7.3.2 同批试剂如超过定标稳定时间，应重新定标，校准周期为14 d。

7.3.3 出现质控漂移时；仪器进行全面保养后；仪器的重要零件更换后均需进行一次校准。

7.4 校准步骤见《Unicel DXI 800ACCESS全自动化学发光免疫分析仪标准操作程序》。

8．操作步骤

8.1 申请单及标本编号　整理检验申请单及血液标本，审核合格后，对检验申请单和血液标本进行编号。

编号总原则：肿瘤标志物全套检验申请单编号每天从某一号（601）开始进行编号，对应于血液标本就应编同样的编号。编号完毕再对全部检验申请单、标本编号进行复查，确认无误后上机测试。

8.2 检验申请单的录入及申请工作单号

8.2.1 有条码的申请单录入　打开南方LIS管理系统→录入→样本排样系统，在测定仪器栏处选择“DXI 800”，然后在样本号处输入样本编号（如601），在试管条码处进行样本扫描，点击存入，申请单上病人信息就录入了电脑，检查申请单上信息与电脑自动调出的信息是否一致。

8.2.2 无条码的申请单录入　打开南方LIS管理系统→资料录入，在仪器栏处选择“DXI 800”，然后在样本号处输入样本编号（如601），在病人ID号处输入申请单上病人ID号，申请单上病人信息自动弹出，无ID号的则手工录入病人姓名、性别、年龄、科别等，检查申请单上信息与电脑自动调出的信息是否一致，检查完后点击“保存”或“F2”保存信息。

8.3 上机测试

8.3.1 待机状态下检查试剂和耗材量是否足够，废物桶是否清空；

8.3.2 将质控物（1 400μl）或待测样本装载在样品架上，主菜单下按[F1]-SampleManager（样品管理器）；

8.3.3 按[F3]-NewRequest（新请求）；

8.3.4 按[F1]-Paitinent/QCRequesets（患者/质控请求）；

8.3.5 在样品架图形界面相应位置处输入样品架号，例如：“1，ENTER”；

8.3.6 在样品杯图形界面相应位置（1～4杯）下输入样本编号，例如：“601，ENTER，质控编号低水平为691，中水平为692”；

8.3.7 在项目区图形界面下输入所需要的测试项目代号，例如：E2为“16，ENTER”；

8.3.8 打开仪器的进样系统透明盖板，将样品架放入进样轨道；

8.3.9 盖下盖板，仪器开始运行申请的操作；

8.3.10 如有条码样本无需进行申请，直接将样品架放入进样轨道，盖下盖板，仪器自动开始运行；

8.3.11 加样完成后，进样系统的指示灯已灭方可打开进样轨道盖板，取出样品架；

8.3.12 运行完成后结果自动传入LIS系统，按《免疫组检验结果报告程序》经审核确认后发出报告；

8.3.13 待机状态下清空废物桶。

注意：必须先检测质控物，质控后方能检测待测样本。

只有在进样系统工作灯熄灭时才能进行进样，卸载操作。

8.4 检验结果确认　应由授权签字人员进行。

9．质量控制措施

9.1 室内质控

9.1.1 质控品　Bio-Rad质控品，复溶前2～8℃冰箱保存，在有效期内使用。复溶后于2～8℃冰箱保存，1周内有效，避免反复冻融。

质控品从冰箱取出需在室温放置30 min以上充分混匀后再测定。

9.1.2 控制参数　E2

9.1.3 质控周期　24 h

9.1.4 测定程序　每天早上将室内质控品加入样品杯内上机检测，仪器自动完成质控品的测定。结果自动传入LIS系统，绘制质控图。

9.1.5 质控规则　采用Levey-Jennings质控图，以Westgard多规则（13S、22S、10X）判断是否在控。

9.1.6 结果分析

9.1.6.1 如果质控结果在控，可以检测病人样品。

9.1.6.2 如果质控结果失控，应分析失控原因。首先应考虑质控物本身的原因，重做一次质控以消除偶然误差，如果不是偶然误差就更换新的质控品再做质控，重测结果还是失控，就要考虑仪器和试剂方面的原因。

9.1.6.3 质控检测完成后，发现失控时填写失控报告，报告质量监督员，查处失控原因并做相应的处理。具体操作按《免疫组室内质控管理程序》处理。

9.2 室间质控

9.2.1 质控品　国家卫生部临检中心质控品（收到质控品后置-15～-20℃冰箱保存，在规定时间内检测），质控品从冰箱取出需在室温放置30 min以上充分混匀后再测定。

9.2.2 质控周期　5个/次，2次/年。

9.2.3 测定程序　将室间质控品当病人样品与之同时检测。

9.2.4 结果报告　在规定时间内上报结果或网上发送结果，禁止同外单位交流对比结果。

9.2.5 结果分析　每次室间质评结果回来后要认真总结经验，编写室间质评小结，有误差时必须及时分析原因，采取措施纠正，检测人员填写失控报告，上报质量主管。具体操作按《免疫组室间质评管理程序》处理。

10．干扰因素

10.1 含10 mg/dl（171μmol/L）胆红素的血清样本，含相当于1 800 mg/dl（20.32 mmol/L）三酰甘油的脂血样本，含1 g/dl（10 g/L）血红蛋白的溶血样本不会影响雌二醇浓度的检测。

11．结果计算及测量不确定度

11.1 以光量子的产出量作为纵坐标，E2的浓度作为横坐标绘制标准曲线。仪器根据标准曲线自动给出每个标本测定结果，测定结果单位以pg/ml或pmol/L表示。换算公式：pmol/L=pg/ml×3.67。

11.2测量不确定度　来源包括标本、标本采集过程、送检时间、保存条件、药物、测试系统、员工素质等因素。

12．生物参考区间

男性：20～75pg/ml。

女性：卵泡期24～114 pg/ml。

黄体期80～273 pg/ml。绝经期20～88 pg/ml。

13．患者检验结果可报告区间20～3 600 pg/ml。14．警告/危急值

血清E2检测结果无警告/危急值。

15．实验室解释

血清E2测定是检查丘脑下部-垂体-生殖腺轴功能的指标之一，主要用于青春期前内分泌疾病的鉴别诊断和闭经或月经异常时对卵巢功能的评价，也是男性睾丸或肝脏肿瘤的诊断指标。

肾上腺皮质增生或肿瘤时，血中E2水平异常增高。卵巢肿瘤、原发性或继发性性早熟、无排卵功能性子宫出血、男性女性化、多胎妊娠、肝硬化、系统性红斑狼疮和冠心病等患者血清E2水平均升高。肥胖男子血中E2水平较高，男性吸烟者血中E2水平也明显高于非吸烟者。

下丘脑病变、垂体前叶功能减退、原发性或继发性卵巢功能不足（如垂体卵巢性不孕或闭经、卵巢囊肿等）、绝经期、皮质醇增多症等患者血中E2水平降低；葡萄胎、无脑儿、妊娠期吸烟妇女等血中E2也显著降低；重症妊娠高血压综合征患者血中E2水平往往较低。若血中E2水平特别低，则提示有胎儿宫内死亡的可能。

16．安全性预警措施

16.1 进行检测分析的全过程，工作人员必须遵守实验室生物安全要求，戴上防护性手套。

16.2 样品的运输和离心过程中注意生物安全，防止溢出，如有污染应立即用0.2%过氧乙酸溶液或75%酒精溶液对环境和设备进行消毒和处理。

16.3 注意正确使用离心机，关盖后才能启动，停机后才能开盖。

16.4 在加样过程中，注意样品的溢出，如有污染应立即用0.2%过氧乙酸溶液或75%酒精溶液进行消毒和处理。

16.5 在上机过程中，注意仪器的安全运行。

16.6 工作人员在检测过程中要注意个人防护，如果皮肤和衣物不慎接触血液和废液，应立即用0.2%过氧乙酸溶液或75%酒精溶液进行消毒处理，再用肥皂水、清水冲洗；如果眼睛中溅入污染物，应立即用洗眼装置冲洗并采取必要的医疗措施。

16.7 与样品接触的一切器皿、仪器组件等都应视为污染物，实验结束后，应对其进行相关的消毒和处理。

16.8 上机的所有样品、废液和废弃物都应按传染物进行相关的消毒和处理。

17．变异的潜在来源

18．报告时间

性激素检验上午11点前的标本于当日出结果，11点后的标本于次日出结果。住院患者的检验结果报告单于当日下午4点前由卫生员发回申请单所在的临床科室。门诊急诊患者的检验结果于当日下午4点前由卫生员发回门诊检验科结果发放处，如果有特殊情况需复检，可适当延长发放报告时间并向临床和患者说明情况并记录。

19．参考文献

[1] 叶应妩，王毓三，申子瑜．全国临床检验操作规程．3版．南京：东南大学出版社，

2007．