【目的要求】 黄酮类化合物（flavonoids）是药用植物中分布较广泛的主要活性成分之一。通过实验熟悉黄酮类化合物的一般制备及测定方法，从而熟悉扩展到其他有效成分的检测。
【实验原理】 通常将具有C6－C3－C6碳骨架结构的一类物质称为类黄酮（flavonoid）化合物，包括黄酮类（flavones）、黄酮醇类（flavonols）、黄烷酮类（flavanones）、噢哢类（aurones）、查耳酮类（chalcones）、花色素苷类（anthocyanins）等，这类化合物广泛分布于植物的各个器官中，多以糖苷的形式存在，所以在提取过程中应防止植物的酸性引起苷水解，提取时可加入少许碳酸钙以避免之。提取时可根据化合物的性质来选择溶剂，黄酮苷类和极性较大的苷元，一般用醇类或乙酸乙酯、丙酮或极性较大的混合溶剂（如甲醇水，1∶1）提取。如果化合物的甲基化合程度高或非糖苷型，则用乙醚较合适。
此类化合物的测定方法有比色法、吸收法、层析法和色谱法等。
【实验材料与仪器设备】 分光光度计、烘箱、天平、水浴锅、索式抽提器、分液漏斗、70%乙醇、乙醚、5%NaNO2、10%Al（NO3）3，40%NaOH、碳酸钙、100μg／ml芦丁（10mg芦丁用70%乙醇定容至100ml）、银杏（或其他植物）叶子。
【实验内容与方法】
1．取银杏（或其他植物）叶子1g置于索式抽提器中，加入70%乙醇100ml及少许CaCO3，抽提6～8h，倒出提取液减压浓缩蒸去乙醇。
2．另称叶子10g于105℃烘箱中烘至恒重，以测定水分含量。
3．浓缩液于分液漏斗中用相同体积的乙醚洗2～3次，以除去叶绿素及蜡质等，然后用70%乙醇定容至100ml，待测。
4．绘制标准曲线：将芦丁溶液用70%乙醇稀释成1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50μg／ml，各吸取1ml于试管中，加70%乙醇1ml，加入0．3ml 5%NaNO2，6min后加入0．3ml 10% Al（NO3）3溶液，6min后再加入2ml 4%NaOH，10min后于分光光度计波长510nm测定OD值。绘制浓度OD－标准曲线。
5．吸取样品溶液1ml，按上述同样的步骤和方法测定得OD值，从标准曲线查得样品中总黄酮的含量（μg／ml），然后根据下式计算每克叶子中总黄酮的含量（μg）：
干叶中总黄酮含量（μg／g）＝V×c （式4－26）
式中：V为1g干叶制得的提取液体积ml，本实验为100ml；c为提取液中测得的总黄酮含量（μg／ml）。
【思考题】 黄酮类化合物在植物的生命活动中起哪些作用？
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