蛋白激酶（）

三、蛋白激酶C（PKC）

PKC是一种Ser／Thr蛋白激酶，受Ca^2＋和二酰甘油（甘油二酯）（DG）作用激活，与细胞分化和增殖密切相关。至今已发现至少有12种PKC亚基，可分为3类：①常规性PKC（conven－tional PKC），包括α、βⅠ、βⅡ和γ4种亚基，其激活需要Ca^2＋、DG和磷脂酰丝氨酸（PS）的参与；②新型PKC（novel PKC），包括ε、δ、η、θ和μ亚基，因缺乏Ca^2＋结合模体，故激活时不需要Ca^2＋；③非典型PKC（atypical PKC），包括ζ、λ和ν亚基，其激活也不需要Ca^2＋。所有PKC亚基的激活都需要磷脂酰丝氨酸（PS），后者是一种膜磷脂，说明PKC的激活要在膜环境中。目前发现大多数PKC亚基存在于胞质中，接受刺激后，可迁移转位到膜上，再受膜脂成分PS、DG等因子作用而被激活。

大量研究表明，许多介导肾小球系膜细胞增生及ECM沉积的致病因素，如TGF－β、PDGF、IL－1、高血糖、血管紧张素Ⅱ、补体以及佛波醇脂（PMA）等都能激活PKC，引起系膜细胞表型的改变，如在培养的大鼠系膜细胞中，先经PMA作用24h，使细胞总PKC活性达到基础表达水平，再加入TGF－β1或血管紧张素Ⅱ（ANG－Ⅱ），结果系膜细胞增生加强。而TGF－β1和ANG－Ⅱ可诱导细胞内磷酸酯蛋白（sulphated protein）分泌到培液中，引起系膜细胞PKC显著下调，或将系膜细胞预先经PKC阻断剂处理，则可减少经TGF－β1和ANG－Ⅱ所诱导的LM和FN的合成。在高糖培液培养系膜细胞中证实，加入ANG－Ⅱ后，细胞内大多数PKC亚基表达均有不同程度的增强，尤其是PKCβ，且伴有不同程度的细胞内转位和分布，如PKCβⅠ、PKCβⅡ和PKCγ向细胞膜转位。在糖尿病肾病动物中，高血糖也能够激活和重新分布肾小球PKC亚基，这种细胞内转位对PKC的活性是很有意义的，它与ANG－Ⅱ刺激后细胞内钙离子浓度增加是一致的。除ANG－Ⅱ外，另有作者发现PMA也能有效地引起细胞内PKC亚基转位迁移和活性增强。

在体外培养的系膜细胞实验中还发现，血栓素（thrombin）、凝血因子Xa（FXa）均能与细胞膜蛋白激酶受体结合，经过激活PKC和酪氨酸激酶通路，引起细胞增生及分泌表型的改变。在大鼠膜性肾炎模型中则发现，补体C5b－9可引起肾小球上皮细胞损伤和蛋白尿。在培养的上皮细胞中证实，C5b－9可同时激活细胞内PKC和p42－MAPK活性，进而使细胞内磷酸酯酶A2（cPLA2）也被激活。如将PKC抑制，可阻断补体诱导的cPLA2激活，而抑制p42－MAPK通路，则无此效应。与补体不同，上皮细胞生长因子（EGF）也能通过PKC通路激活cPLA2，但却可被p42－MAPK竞争所抑制。

众多实验表明，上述不同的信号转导通路之间常常存在相互作用，相互串话，从而构成一个相互交叉的作用网络，如TGF－β1对系膜细胞的作用，除Smads通路外，还可能激活其他激酶系统，包括蛋白激酶A、酪蛋白激酶Ⅱ，以及ERK和p38－MAPK。也有报道TGF－β1激活ERK和JUK－MAPK通路，而不是p38－MAPK。用ERK阻断剂可降低因TGF－β1刺激所致的胶原mRNA表达，或用变异性ERK基因转染系膜细胞，则抑制TGF－β1特异性P3TP－LUX基因以及胶原启动子荧光素报告基因。这些结果提示ERK－MAPK通路可以增强或放大Smads通路的调节功能。但也有报道ERK可能通过增强Smad蛋白磷酸化，而抑制Smad的信号转导。

近来也有实验证明TGF－β1可诱导系膜细胞结缔组织生长因子（CTGF）的启动子活性，其中有Smad、PKC和ras／MEK／ERK通路的共同参与，若阻断ras／MEK／ERK通路，只能部分影响Smad活性。有作者用高糖刺激或机械张力刺激体外培养的系膜细胞，发现启动MAPK通路前常先有PKC的激活，如用PKC抑制剂calphostin C，可完全阻断p38－MAPK的活性，提示PKC是激活p38的主要因素。另一实验用TGF－β1刺激人系膜细胞，结果可同时增强Smad3启动子（COL1A2）和PKCδ的活性，并出现PKCδ向浆膜转位迁移，继而促进细胞Ⅰ型胶原mRNA表达升高，加入PKCδ阻断剂rottletin后，可明显抑制Smad3启动子COL1A2的活性，降低因TGF－β1诱导的Ⅰ型胶原mRNA表达。这些结果均证明，在肾小球ECM过度积聚的分子机制中，因各种因子所引起的信号转导通路中，上述信号转导分子的“串话”或相互作用可能是十分普遍存在的分子条件。