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紫外吸收性质及重要的呈色反应

时间:2022-07-07 百科知识 版权反馈
【摘要】:蛋白质在紫外光范围内有吸收峰,是因为色氨酸及酪氨酸残基内的共轭双键在280 nm波长有特征性吸收峰。在280 nm波长处,蛋白质的光密度值与其浓度呈正比关系,常被用于测定溶液中蛋白质含量。具有两个肽键以上的蛋白质及多肽都可发生双缩脲反应,氨基酸无此反应。

蛋白质紫外光范围内有吸收峰,是因为色氨酸及酪氨酸残基内的共轭双键在280 nm波长有特征性吸收峰。在280 nm波长处,蛋白质的光密度值与其浓度呈正比关系,常被用于测定溶液中蛋白质含量。

蛋白质分子中不仅有多个肽键,而且侧链上还有多种基团各具有特定的反应性能,可与多种化学试剂反应生成有色化合物,测定溶液中该化合物生成的多少可作为蛋白质定量的重要方法。例如双缩脲反应(biuret reaction)是蛋白质肽键所特有的反应。在碱性条件下,蛋白质分子内的肽键可与Cu2+形成络合盐而呈紫色。具有两个肽键以上的蛋白质及多肽都可发生双缩脲反应,氨基酸无此反应。酚试剂方法是指蛋白质分子中色氨酸及酪氨酸残基在碱性铜存在下,与磷钨酸和磷钼酸反应生成蓝色化合物,在540 nm波长处有吸收。该方法灵敏度较高,特异性强,不失为一种常用的蛋白质定量方法。

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