【摘要】：激光显微切割是利用337nm的紫外激光对显微镜下的生物样本进行切割和分离，以备进一步做分子水平的研究。在肾脏病研究中，利用此项技术，可以根据需要从病理切片中切取肾小球、肾小管、间质以及血管等微结构，后从这些结构中提取DNA、RNA或者蛋白质，最后采用PCR技术和Western blot分析基因和蛋白质水平。[1]吕杨，尹忠，王兆霞，等.激光微切割与定量PCR技术分析肾脏病理切片RNA.中国生物化学与分子生物学报，2005,21:695-699
激光显微切割是利用337nm的紫外激光对显微镜下的生物样本（组织、细胞簇、单细胞、染色体、染色体片断等）进行切割和分离，以备进一步做分子水平的研究。在肾脏病研究中，利用此项技术，可以根据需要从病理切片中切取肾小球、肾小管、间质以及血管等微结构，后从这些结构中提取DNA、RNA或者蛋白质，最后采用PCR技术和Western blot分析基因和蛋白质水平。
（一）显微切割的方法
1.材料来源 微切割可用于福尔马林固定石蜡包埋的组织切片、冰冻切片、培养细胞和细胞涂片。但所用载玻片不准涂抹任何黏附剂，常用的组织切片是HE染色的常规石蜡切片（厚5μm）。
2.实验操作步骤
（1）将处理好的组织切片放到显微镜下（组织切片需要使用专门切割用载玻片）。
（2）打开仪器，运行程序。
（3）在屏幕上寻找需要切取的对象，并用软件将其标记。
（4）设置好激光强度和焦距，进行切取（需事先备好用于收集样本的EP管），见图3-24。
图3-24 A.样本切割前；B.样本切割后；C.样本分离
3.注意事项
（1）染色对核酸和蛋白质影响较大，故尽量减少染色的步骤。
（2）切取后的标本需立即进行冰冻保存，以用于后续实验。
（二）显微切割的应用
1.细胞基因突变及微卫星变异的研究。
2.细胞基因拷贝数的变化和甲基化水平的检测。
3.定量RT-PCR。
4.比较基因组杂交。
5.cDNA微阵列（芯片）。
[1]吕杨，尹忠，王兆霞，等.激光微切割与定量PCR技术分析肾脏病理切片RNA.中国生物化学与分子生物学报，2005,21:695-699
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