【摘要】：利用流式细胞仪把标记上荧光的细胞从其他细胞中分离出来，进行培养、分析或其他生物学研究。比较容易便捷地获得高纯度、高活性的细胞。无论贴壁细胞还是悬浮细胞分选前，必须先分析实验样本检测指标表达情况或者目的细胞的含量：取100μl细胞上机，检测目的细胞含量，剩余细胞记数，离心。根据目的细胞含量，设定分选逻辑和分选模式。调节细胞浓度，达到上样速率6000～8000个/s。
（一）实验目的
利用流式细胞仪把标记上荧光的细胞从其他细胞中分离出来，进行培养、分析或其他生物学研究。比较容易便捷地获得高纯度、高活性的细胞。
（二）仪器试剂
1.流式细胞仪 波长选择：488nm、405nm。
2.特定荧光抗体，4%BSA溶液（使用1×PBS作为溶剂）。
（三）实验流程
1.细胞处理 分为贴壁细胞和悬浮细胞。
（1）贴壁细胞：去除培养液，胰酶消化，制成细胞悬液，细胞总数至少要达到1×107/管。
（2）悬浮细胞：收集细胞，制成细胞悬液，细胞总数至少要达到1×107/管。
（3）利用荧光抗体染色细胞。
（4）无论贴壁细胞还是悬浮细胞分选前，必须先分析实验样本检测指标表达情况或者目的细胞的含量：取100μl细胞上机，检测目的细胞含量，剩余细胞记数，离心。
（5）根据目的细胞含量，设定分选逻辑和分选模式。调节细胞浓度，达到上样速率6000～8000个/s。保证纯度98%以上。
（6）上机，分选。
（7）分选后细胞，1500r，5min，离心收集细胞。
2.上机分选前准备 如果不需要无菌分选，可仅用少量乙醇冲洗，再用PBS冲洗至每管收集约20ml后即可上机分选。
3.上机分选步骤 打开cellquest软件，先上对照细胞样本，确定细胞获取条件，并划定需要获取的细胞范围。在Acquiremenu菜单下，选择SortSetup，并设定Sort Setup下的一系列参数，设定完毕，Acquire，上样分选。
4.细胞分选完成后，取少量细胞，检测细胞纯度和回收率。保证细胞纯度98%以上。
5.将收集的细胞用于后续实验。
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