二期止血缺陷的筛选检验

二期止血缺陷的是指血液凝固和纤溶异常所引起的止血功能缺陷。包括全血凝固时间、血浆凝血酶原时间及活化部分凝血活酶时间。全血凝固时间试验的灵敏度远不及活化部分凝血活酶时间，实际临床应用已让位于后者。在此重点介绍血浆凝血酶原时间及活化部分凝血活酶时间测定。

（一）血浆凝血酶原时间测定

【原理】　在抗凝血浆中，加入足够量的组织凝血活酶（组织因子，TF）和适量的钙离子，即可满足外源凝血的全部条件。从加入钙离子到血浆凝固所需要的时间即称为血浆凝血酶原时间（prothrombin time，PT）。PT的长短反映了血浆中凝血酶原、纤维蛋白原和因子Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ的水平。

【试剂】

1.因子Ⅲ试剂常用人脑或兔脑粉浸出液，但生产厂家必须注明所售因子Ⅲ试剂的国际敏感指数（ISI），ISI越接近1，表明因子Ⅲ越敏感。

2.0.025mol/L氯化钙溶液。

【操作方法】

1.在涂硅或塑料试管内加入0.13mol/L枸橼酸钠溶液0.2ml，然后加入受检血液1.8ml充分混匀，3000r/min离心10min，分离乏血小板血浆。

2.取小试管1支，放入血浆和因子Ⅲ试剂各0.1ml，温育30s然后加0.025mol/L氯化钙溶液0.1ml，立即启动秒表，不断轻轻倾斜试管，记录至液体停止流动所需的时间。重复两次取平均值，并测正常参比血浆（20份正常人混合血浆）作为对照。

【参考值】

1.平均值12±1s。

2.凝血酶原比值（PT ratio，PTR）＝被检血浆PT/正常参比血浆PT。

参考值：1.00±0.05。

3.国际标准化比值（international normalized ratio，INR）＝PTRISI。

参考值因国际敏感度指数（international sensitivity index，ISI）而异。

【临床意义】　PT是检测外源性凝血系统常用的筛选试验，也是监测口服抗凝剂用量有效的检测指标。

1.PT延长 PT超过正常对照3s以上或凝血酶原比值超过正常范围即为延长，主要见于：①先天性因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ减少及纤维蛋白原的缺乏（低或无纤维蛋白血症）；②获得性凝血因子缺乏，如DIC、原发性纤溶亢进症、肝病的阻塞性黄疸和维生素K缺乏、血循环中抗凝物质增多等。

2.PT缩短 ①先天性因子Ⅴ增多；②DIC早期（高凝状态）；③口服避孕药、其他血栓前状态及血栓性疾病（凝血因子和血小板活性增高，血管损伤等无法为血栓形成的基础）。

3.服抗凝药的监测 PT及INR是检测抗凝剂用量的首选指标，INR在2.0～3.0用药较为合理和安全。

（二）活化部分凝血活酶时间测定

【原理】　在抗凝血浆中，加入足量的活化接触因子激活剂和部分凝血活酶（代替血小板的磷脂），再加入适量的钙离子即可满足内源抗凝血的全部条件。从加入钙离子到血浆凝固所需的时间即称为活化部分凝血活酶时间（activated partial thromboplastin time，APTT）。

【试剂】

1.受检者血浆：以0.1mol/L草酸钠溶液或0.13mol/L枸橼酸钠溶液1:9抗凝，以3 000r/min离心10min，获得乏血小板血浆。

2.4%白陶土脑磷脂混悬液。

3.0.025mol/L氯化钙溶液。

【操作方法】

1.取受检血浆、白陶土脑磷脂的混悬液各0.1ml，置37℃水浴温育3min，其间轻轻摇荡数次。

2.加入0.025mol/L氯化钙溶液0.1ml，立刻启动秒表，轻轻倾斜并观察出现纤维蛋白丝的时间。重复两次取平均值，需做正常对照。

【参考值】　男性：37±3.3s；

　　　　　　女性：37.5±2.8s。

【临床意义】　本试验是目前最常用的敏感的检查内源凝血系统是否正常的筛选试验。目前所用的大多数APTT测定方法，凡当血浆凝血因子低于正常水平的15%～30%即可异常。

1.APTT延长 APTT结果超过正常对照10s以上即为正常延长。主要用于发现轻型的血友病。血中抗凝血物如凝血因子抑制物或肝素水平增高时，当凝血酶原、纤维蛋白原及因子Ⅴ、Ⅹ缺乏时也可延长。

2.APTT缩短 见于DIC，血栓前状态及血栓性疾病。

3.肝素治疗监护 一般在肝素治疗期间，APTT维持在正常对照的1.5～3.0倍为宜。但要注意APTT测定结果必须与肝素治疗范围的血浆浓度呈线性关系，否则不宜使用。