碱性非特异性酯酶染色

【原理】　血细胞中的α-丁酸萘酚酯酶（α-naphythyol butyrate esterase，α-NBE）在pH碱性条件下，水解基质液中的α-丁酸萘酚而产生α-萘酚，后者与重氮盐偶联，形成不溶性偶氮色素，定位于酯酶所在部位。

【试剂】

1.固定液 40%甲醛溶液。

2.温育液 0.1mol/L磷酸缓冲液（pH8.0）10mlα-丁酸萘酚0.01ml溶于0.5ml丙酮中，坚固蓝B（B盐）15mg，混匀。

3.复染液 苏木精溶液或1%甲绿溶液。

【操作方法】

1.新鲜干燥涂片标本以甲醛蒸气熏蒸5min，流水冲洗，晾干。

2.置入温育液，37℃水浴箱内作用1h，流水冲洗，晾干。

3.用苏木精溶液或1%甲绿溶液复染1～2min，流水冲洗，晾干后镜检。

【结果】

1.染色结果 阳性反应为胞质内出现蓝色颗粒状沉淀。

2.正常血细胞染色反应 ①粒细胞系，各期粒细胞均呈阴性反应；②单核细胞呈阳性反应，可被氟化钠抑制；③组织细胞呈阳性反应，不被氟化钠抑制；④淋巴细胞系，外周血的T淋巴细胞可呈致密的局限性点状阳性反应；B淋巴细胞呈阴性反应；非T非B淋巴细胞也可呈散在颗粒状阳性反应；⑤巨核细胞、幼红细胞和浆细胞呈阴性或弱阳性反应。

【临床意义】　有助于急性白血病的类型鉴别。

1.急性粒细胞白血病 白血病性原始粒细胞呈阴性或弱阳性反应。

2.急性单核细胞白血病 原始单核细胞、幼单核细胞和单核细胞均可呈阳性反应，能被氟化钠所抑制。

3.急性淋巴细胞白血病 原淋巴细胞、幼稚淋巴细胞一般呈阴性反应。

4.恶性组织细胞病 异常组织细胞可呈阳性反应，不被氟化钠抑制。

5.多毛细胞白血病 毛细胞的阳性反应呈弥漫分布的细小颗粒，且可聚成半月形的粗颗粒，不被氟化钠抑制，呈持续阳性反应。

【注意事项】　标本应为新鲜骨髓涂片和血涂片。