昆虫玻片标本的制作步骤

1．蚊　雄蚊外生殖器在分类鉴定上非常重要，须将其制成玻片标本，然后在显微镜下观察。如果是干藏标本，应待虫体回潮、柔软后，从雄蚊腹部第7腹节处剪下，按上述方法制片。也可将雄蚊外生殖器置70%乙醇中浸泡短时，将乙醇吸出后加入10%氢氧化钾溶液中浸泡数小时，吸出氢氧化钾液后加清水浸泡，换水数次，再经过95%乙醇10min，木馏油5min，用加拿大树香封制即可。

蚊幼虫标本制作时，一般采用攸帕拉或水合氯醛树胶剂封制方法。采用攸帕拉封制时，幼虫的头、胸及腹部最细小的毛均清楚可见。而采用后一种方法时，封制的手续则很简便，从保存液取出的标本用清水清洗后直接用水合氯醛树胶封制即可。如用加拿大树香封片，将幼虫由水中取出后再用各级乙醇脱水、冬青油透明，最后用加拿大树香封片。在封制蚊幼虫标本时，须将幼虫的头、胸、腹背面朝上展示虫体构造，以便于种的鉴定。在制作蚊幼虫，尤其是库蚊族的幼虫时，在封片时应注意将第6与第7腹节之间划断，使蚊幼虫腹节后端的侧面向上展示，以利查视呼吸管及腹节的构造。若按蚊消化道内有残留食物，常影响背板构造的检视，为清除其肠内食物，可将活的按蚊幼虫置放于1%硫酸镁溶液中数小时，然后烫死制片或保存于70%乙醇中。进行幼虫鉴定时，如不确定或者想进一步作生活史各期的系统研究，常将成熟幼虫的皮、蛹皮与孵出的成蚊编制为同一号码保存，以便进一步观察研究。幼虫化蛹时的蜕皮，应保存于70%乙醇中以备标本制作。在封制成熟幼虫的皮时，将皮连同保存液一起倾入玻璃皿中，吸弃保存液换以清水。取大口径吸管将幼虫皮吸置玻片的中央，置解剖镜下用解剖针仔细拨动幼虫皮，除净污物，将其展示清楚并无皱折，然后用滤纸吸干，加1滴95%乙醇使皮变硬，再加1滴清水洗去乙醇，吸净水分后加1滴水合氯醛树胶剂封制即可。如用加拿大树香固封，在加1滴95%乙醇后再加以100%乙醇完全脱水，吸弃乙醇加冬青油透明，然后以加拿大树香固封。也可按照成虫时期的整个小型昆虫制片的方法操作，从步骤（1）开始至步骤（3）时，须于第一次洗浸液中加数滴醋酸，然后用清水连续洗涤数次后即封入于水合氯醛树胶剂中。或从步骤（1）开始至步骤（5）的纯乙醇结束，然后封入于攸帕拉中。如用针将幼虫皮由腹面中央切开摊平，这样在封片后属于背面或腹面的毛，更清楚可辨。蚊蛹皮的制片方法类似与幼虫皮的制作，但宜从蛹皮的头胸部与腹部将其分开，将头胸部自背裂处左右展开使腹面向上，腹部使背面向上，一同封制在玻片上。

一般而言，水合氯醛树胶剂制片方法简便，不用脱水即可封入。而加拿大树香或攸帕拉封片法，制作后的标本则可永久保存。

蚊的内部构造，如蚊胃与涎腺，解剖分离后，可参照下述操作过程进行标本制作：

（1）蚊胃标本制作方法一：①将解剖出的蚊胃移置于载玻片上的一小滴生理盐水中，盖上盖玻片。②加1滴新鲜配制的鲍氏固定液（Bouin＇s fixative）（配制方法见试剂与溶液节）于盖玻片一侧的边缘上，然后在盖玻片另一侧的边缘上放置一滤纸。这样，滤纸即可吸去盖片与载玻片间的盐水，而同时又能将鲍氏固定液吸经蚊胃标本。③固定液与蚊胃接触5min后，用针尖挑起盖玻片。此时蚊胃多黏附于盖玻片或载玻片上。黏附的胃，后面的步骤应连同所附的盖玻片或载玻片一同处理。未黏附的胃，应用滴管吸取，移入染色皿或小玻璃管中，然后以毛细吸管加入或吸弃以下各步骤的水或试剂。④加蒸馏水清洗蚊胃，然后再浸泡于蒸馏水中2h，以洗净固定液中的苦味酸（picric acid）。⑤将蚊胃浸泡于稀释10倍的梅氏酸性矾紫染剂（Mayer＇s acid haemalum）（配制方法见试剂与溶液节）1h。若蚊胃壁上存在感染疟原虫的囊合子，用此染剂可使囊合子着色。⑥于自来水中浸洗蚊胃，以洗去过剩的染剂，至蚊胃变成蓝色。⑦将蚊胃依次浸入于50%、70%、85%、95%及100%乙醇中脱水，每一浓度的乙醇中各浸15～30min。⑧于石炭酸二甲苯（carbolxylene）（配制方法见试剂与溶液节）中浸蚊胃数分钟至蚊胃透明。⑨用加拿大树香封片。

（2）蚊胃标本制作方法二：①于改良斯卫剂（Swellengrebel＇s medium）（配制方法见试剂与溶液节）中解剖蚊虫体，将解剖出来的蚊胃置放于载玻片上的一小滴斯卫剂中。②加盖玻片，于盖玻片的边缘，用滤纸吸去盖玻片与载玻片之间过剩的斯卫剂。③将封蜡（配制方法见试剂与溶液节）溶化，涂抹于盖玻片与载玻片相接触的边缘四周而封固之。

制作蚊胃标本时，应注意囊合子与蚊胃中的细胞、脂肪小滴等结构的区别。囊合子发生在蚊胃壁的外侧，有明显的囊壁，圆形，直径70～80μm，不透明。未成熟的囊合子内含黑色颗粒，成熟时内部具许多线条状构造。在盖玻片下，囊合子位于胃的侧缘时，镜下较易观察。因此当蚊胃感染囊合子甚少时，应于蚊胃在载玻片与盖玻片间的盐水中用解剖针轻轻推动盖玻片的边缘，使胃滚转，使得胃的全面都逐步经过侧面的位置，找到最恰当的位置时即用固定液固定之，封片。若蚊胃在盐水中发生收缩，可将玻片在火焰上稍加温，待蚊胃膨胀后，再滚转之。

（3）蚊涎腺标本的制作方法：剖验涎腺，主要是为查验蚊虫内有无疟原虫的子孢子的存在。标本制作方法可参照上述蚊胃标本制作方法二进行。具体操作时，将蚊虫放在生理盐水中解剖，剖出涎腺后移去头、胸。加1滴盐水于涎腺，盖上盖玻片镜下检查。呈新月状或纺锤状的子孢子在无染色情况下，可见特殊的轻缓的微弯运动，感染量多时比较明显。有时，蚊涎腺内可查见一种鞭毛体易被误认为子孢子，但二者的形状与运行明显不同，应加以区别。无论在盐水中镜检是否查见子孢子，最后必须轻按盖玻片以压碎涎腺，使腺内可能含有的子孢子体逸出，然后挑起盖玻片，翻转，待载玻片和盖玻片上含有涎腺的盐液干燥后，用吉氏染液（Giemsa′s stain）或瑞氏染液（Wright′s stain）染色，以复查有无子孢子体存在。

吉氏染色法染色过程如下：①滴加甲醇（methyl alcohol）于载玻片和盖玻片上含有涎腺的盐液干燥膜层上以固定之，待干燥。②将载玻片及盖玻片浸没于1滴吉氏染剂加1ml蒸馏水新鲜配制的染液中，染30～60min后，蒸馏水冲洗10～20s。③直立载玻片及盖玻片，使其自然干燥。选择载玻片上无膜层处，加1滴加拿大树香，将染色后的盖玻片覆置于其上。而载玻片上染色后的膜层处不必加盖玻片。

瑞氏染色法染色过程如下：①滴加染剂于载玻片和盖玻片上含有涎腺的盐液干燥膜层上，染色60～90s。②滴加等量的蒸馏水，继续染3min后，弃去染液。③将载玻片及盖玻片用蒸馏水冲洗10s。④直立载玻片及盖玻片，使其自然干燥。选择载玻片上无膜层处，加1滴加拿大树香，将染色后的盖玻片覆置于其上。而载玻片上染色后的膜层处可不加盖玻片。

一般情况下，玻片法制作的标本，往往能保存相当长久或作为永久标本收藏。

2．蝇　蝇幼虫玻片标本制作时，1、2龄幼虫可整体封入，封制时注意将幼虫的后端折转使后气门朝上。3龄幼虫可切割成头部、躯干和尾三部分。头部应展示前气门和头咽骨板、口钩等结构的侧面观。躯干大约包括第1至第7各腹节，可沿背部中央纵线切开，在玻片上展平后封片。尾部主要展示后端表面、后气门和肛区的后面观，如尾部过高，可在周围剪几道裂口便于封片。以下为具体操作步骤：先如上述将幼虫剪开，投入100℃左右的10%氢氧化钾液中，煮沸数分钟（注意液体蒸发后，须加水），以使虫体内的肌肉腐蚀溶解。清水洗涤后，用加有数滴冰醋酸的蒸馏水中和剩余的氢氧化钾，再以清水洗涤。然后经乙醇脱水、二甲苯（或冬青油、丁香油等任一种透明试剂）透明，最后用加拿大树香封片。或采用攸帕拉或水合氯醛树胶剂封片。

3．白蛉　白蛉的成虫标本一般需染色。在制片时，通常将成蛉的口腔、咽及受精囊从虫体内解剖分离，单独封制。具体的操作步骤：将染色透明标本移至玻片中央，加一滴冬青油，在玻片的右侧滴加一小滴加拿大树香。在解剖镜下左手持解剖针以固定白蛉胸部，右手持解剖针先将白蛉下颚须基部与口喙相连之处剖开，然后按住唇基慢慢地向外拖移。如此，口腔与咽部就可从头部依次拖出。将拖出的口腔和咽部移置在右侧的一小滴加拿大树香中，用针拨动，使口腔与咽部背面向上，覆盖上一块方形小玻片。若是雄蛉标本，取出口腔与咽部后，再用吸水纸将龄体上的冬青油吸去，滴上一滴加拿大树香，用解剖针将蛉体的翅、足和雄外生殖器展示清楚，盖上小玻片即可。如果是雌蛉，除封制口腔、咽部等器官方法同上外，还须封制受精囊。其方法是先用解剖针将雌蛉末一腹节腹背两边划破，然后左手持针以固定蛉体，右手持针轻按腹部末节的背片，向后缓慢拖移。这样，腹部末端连同受精囊即与腹部脱离。随后，将腹部末端连同受精囊置入蛉体左侧的一滴加拿大树香里，盖上小方块玻片。将玻片中央的蛉体、翅、足等结构展示清楚，吸去冬青油，滴加加拿大树香，盖上小方块玻片。这样，成蛉玻片标本的制作即完成。

在制作昆虫的翅或足等外部构造标本时，最好取干藏标本。在解剖镜下用解剖针自基部切割后置玻片上，加一滴纯乙醇湿润后，待乙醇挥发将干时加一滴攸帕拉或加拿大树香，加上盖玻片即可。

另外，也可在玻片上封制昆虫的临时标本，供立即镜检。封制方法较简单，根据昆虫的种类、发育时期及虫体内外构造的性质特点，选用水、生理盐水、甘油、乙醇、纯苯酚、乳酚（lactophenol）、甘油凝胶（glycerine jelly）、水合氯醛剂（chloral hydrate medium）或乳水合氯醛（lacto－chloral）等任何一种适宜的试剂或水。将上述试剂或水的一种，加一滴于载玻片上，移置待验虫体于其中，加盖玻片即可。例如，蚊幼虫被杀死后即可封制于水、水合氯醛或乳酚中；白蛉的幼虫和蛹可封于乳水合氯醛或纯苯酚中；蚤经碱性液处理后可封于水、70%乙醇、或70%乙醇与甘油等量的混合液中；成蚊的雄外生殖器可封于纯苯酚或乳水合氯醛中。临时标本待检验完毕后，仍可浸于保存液中收藏。