【摘要】：13．3．7 羟多巴胺法13．3．7．1 原理6－羟多巴胺自氧化过程中产生，其机制与肾上腺素自氧化类似。6－羟多巴胺－醌型在490nm处呈现最大吸收，加入SOD可抑制其反应。可通过测定样品对6－羟多巴胺自氧化的抑制程度，推算样品中SOD的酶活性。酶活性单位定义：在一定条件下，抑制6－羟多巴胺氧化达50%所需的SOD量。缺点在于相对于肾上腺素法或连苯三酚法而言，6－羟多巴胺氧化的线性时限区间非常有限，而且测定结果易受干扰。
羟多巴胺法_超氧化物歧化酶
13．3．7 羟多巴胺法
13．3．7．1 原理
6－羟多巴胺自氧化过程中产生
，其机制与肾上腺素自氧化类似。
6－OHDA为6－羟多巴胺；SQ·为6－羟多巴胺半醌自由基；Q为6－羟多巴胺－醌型。
6－羟多巴胺－醌型在490nm处呈现最大吸收，加入SOD可抑制其反应。可通过测定样品对6－羟多巴胺自氧化的抑制程度，推算样品中SOD的酶活性。
酶活性单位定义：在一定条件下，抑制6－羟多巴胺氧化达50%所需的SOD量。
13．3．7．2 测定方法及特点
按表13－10加样，以双蒸水调零，加入6－羟多巴胺后开始计时，于分光光度计490nm处测定第15秒钟时的吸光度值A。
表13－10 6－羟多巴胺法试剂加样表
按下式求出各测定管的酶抑制率：
以酶抑制率为纵坐标，样品液的加入体积（μL）为横坐标，在半对数坐标纸上绘制出抑制曲线，找出抑制50%时对应的样品体积（μL）（V），再按下式求出每毫克样品蛋白质中所含SOD活性单位。
样品酶活性（u/mg）＝V/cPr
式中，cPr为待测样品中的蛋白质含量（mg/mL）。
方法特点：该法操作简便，适用于测定各种生物样品中SOD活性，测定结果与肾上腺素自氧化法等方法一致，并且测定样品所需时间很短，适用于大批量样品同时测定。缺点在于相对于肾上腺素法或连苯三酚法而言，6－羟多巴胺氧化的线性时限区间非常有限，而且测定结果易受干扰。理论上此法可以测定样品中的SOD，但由于上述缺点，且其他测定方法较之更灵敏，因此在一般实验室中不大采用此法。
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