四、实验步骤
1．发根:将蚕豆、玉米、黑麦等植物种子用0．1%升汞消毒10min，经流水冲洗，温水浸种浸泡1～2天后，置25℃恒温箱中发根。待主根长到2cm左右时剪去主根(须根系植物的种子发出的主根不需剪掉)，让其充分长出侧根。待侧根长到1～2cm时，于适宜时间用蒸馏水洗净，将水吸干，剪取根尖0．5～1cm进行预处理。
2．预处理:
(1)0．1%秋水仙素、或饱和对二氯苯水溶液、或0．002mol/L 8－羟基喹啉处理:将剪下的根尖立即放入0．1%秋水仙素、或饱和对二氯苯水溶液、或0．002mol/L 8－羟基喹啉中，以药液浸没根尖为度，处理3～4h。抑制和破坏纺锤丝的形成，使根尖细胞延迟其染色体的分离，增加中期分裂相，并使染色体分散于细胞中，以便观察计数。
(2)冷处理:将根尖放入盛有蒸馏水的指形管中，置0℃～4℃的冰箱(或在冰水)中处理24～40h，染色体数较多的实验材料可适当延长处理时间，但需注意勿使材料结冰。此法简便、安全，效果也好，而且经冰水混合物处理后细胞破裂程度较小，染色体不致丢失;其染色体的收缩程度较小，常用于显带技术，有利于得到更细致丰富的染色体带型。
(3)混合药剂处理:在某些情况下，采用混合药剂处理可取得更好的效果。如:100ml对二氯苯饱和水溶液加1～2滴α－溴萘饱和液处理3～4h，0．2%秋水仙素溶液加1滴α－溴萘饱和水溶液处理1～2h等。应该注意采用药剂处理时温度不能过高，以10℃～15℃为宜。
3．固定:材料经预处理后，用流水冲洗，然后投入甲醇－冰醋酸固定液(3∶1，现配现用)中固定20～24h，用95%的乙醇洗两次，转入70%乙醇中保存备用。固定的目的是将材料迅速杀死，并使染色体形态、结构尽可能保持不变和便于染色。
4．解离:常用酸解法:从70%乙醇中取出固定好的根尖，用流水冲洗3min，吸水纸吸干，放入小试管中加适量1 mol/L HCl于60℃水浴解离10～15min(蚕豆根尖10min，玉米、黑麦、洋葱15min)。对于玉米、黑麦和洋葱等，有时酸解后还可在25℃下酶解20min。
5．染色:针对不同材料或希望获得不同的效果，可选择适当的染液和染色方法。用于常规染色体形态结构鉴定的染色方法很多，常用的有如下几种。
(1)改良苯酚品红染色:若只作临时镜检观察，对解离后材料水洗并吸干，挑取根尖乳白色分生组织于载玻片上夹碎捣烂，滴加1～2滴染液，染色10～15min，压片。
(2)孚尔根反应染色:将解离材料洗净或直接转入席夫试剂于室温(最好在10℃左右)进行孚尔根染色反应1～5h或过夜，然后在1mol/L HCl中漂洗3次，每次5～10min，再经流水冲洗5～10min，保存于45%醋酸中供压片。若材料染色不足，也可再用1%醋酸洋红复染压片。
孚尔根反应是鉴别细胞中DNA的一种组织化学方法，它仅对核及染色体中的DNA显色，颜色比较均匀一致而清晰，细胞软化较好。染色后染色体一般比较柔软，压片时较长的染色体容易相互纠缠而不便于分散。试验表明，蚕豆、小麦、黑麦、洋葱、葱、蒜、百合等均适合于孚尔根染色。
注:孚尔根染色反应材料必须采用酸解法进行解离，并且对前处理要求较高，解离时间过长，孚尔根反应会减退;减退程度还与固定剂种类有关，一般甲醇－冰醋酸固定液(3∶1)的减退作用比FAA固定液明显。因此孚尔根反应染色可采用FAA固定材料，然后将固定材料经过50%乙醇转入水中，再转入1mol/L HCl中，于60℃水浴中解离5～15min，并迅速换入1mol/L冷HCl中。解离材料经水洗1～2次或直接进行孚尔根反应。
(3)1%醋酸洋红染色:若只作临时镜检观察，将解离水洗后的材料吸干，挑取根尖乳白色分生组织于载玻片上夹碎捣烂，滴加1～2滴染液，染色10～20min，压片。
(4)醋酸地衣红染色:将材料置盛染液的试管中，在酒精灯上加热3～5秒，反复2～3次，静置10～30min或更长时间。取出材料用染液压片，可在压片后稍加热以加深染色。
注:由于醋酸地衣红易溶于乙醇，因此70%乙醇保存材料取出后应当充分洗净后浸入45%醋酸中再进行染色。
(5)铁矾－苏木精染色:经HCl解离后的材料用流水彻底冲洗后，转入新鲜配制的4%铁矾溶液媒染2～4h(如加温至30℃～40℃媒染，则可缩短至1h左右)，再用水冲洗20～25min，务必将残留的铁矾洗净。媒染后材料转入0．5%苏木精中染色2～4h或更长时间(如加入苏木精后，染液很快混浊、发黑，则表示铁矾未洗净，需重新冲洗，再行染色)，染色后用水冲洗5～10min，置45%醋酸内分色、软化10～20min(可再经1%氨水处理1min，使材料充分软化)，压片(若染色后暂时不压片，可将材料转入70%乙醇或蒸馏水保存于4℃冰箱中)。
注:经染色后，除染色体能染上极深的蓝色外，细胞壁及细胞质也都能不同程度地着色;同时由于染色体吸附有媒染剂的金属离子，易变坚硬，压片后易分散。因此必须用45%醋酸处理，以使染色体呈深蓝色，而细胞质退淡，染色体软化。此法对各种植物的染色体均可染上较深的颜色、反差大、分色清晰，利于摄影和制片标本长期保存，为其他染色方法所不及。
6．压片:在经染色的材料上加一滴染液，盖上盖玻片，覆一层吸水纸，用带橡皮头的铅笔垂直敲打，或以拇指垂直紧压盖片(注意勿使盖片搓动)，使材料分散压平，便于观察。
7．镜检:通常染色清晰而又分散得很好的分裂相只是少数，因此压片后要认真仔细地进行镜检。先在低倍镜下寻找有分裂相的视野，再用高倍镜或油镜仔细观察、计数或拍照。调节可变光栏与反光镜，使光线明暗合适，视场亮度适中。注意观察有丝分裂全过程的染色体形态变化，找出染色体分散好的中期细胞进行染色体计数，给好的分裂图像作上标记，以便再观察。
8．临时封片保存:制片短时间保存要防止玻片间的溶液干涸，空气进入，无法观察。临时片保存可在盖片周围滴上45%醋酸或染液，放入有湿滤纸的培养皿内，加盖后可保存数小时甚至一天。如制片标本符合要求，而又只需要短期(一般在一周以内)保存，可采用石蜡临时封片。用烧红解剖针挑取少量石蜡(或石蜡与凡士林等体积混合物)沿盖片周围封闭。
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