（一）血浆凝血酶-抗凝血酶复合物检测
【原理】测定血浆凝血酶-抗凝血酶复合物（thrombin-antithrombin，TAT）常用双抗体夹心ELISA法。用兔抗人凝血酶抗体包被于固相板上，待检血浆和标准品中的TAT以其凝血酶与抗凝血酶抗体结合，再加入辣根过氧化物酶标记的鼠抗人凝血酶抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，洗涤后加入底物显色，显色颜色深浅与TAT含量成正比。
【试剂】具体见试剂盒。
【操作】
1.血浆制备：静脉采血1.8ml加0.109mol/L枸橼酸钠0.2ml，混匀抗凝。制备贫血小板血浆。
2.按照试剂盒说明和要求操作：包被、加样、酶标抗体、显色、终止反应。
3.在492nm酶标仪上测出标准管和测定管的吸光度A值，以标准管浓度为横坐标，标准管的吸光度为纵坐标，制作标准曲线；在标准曲线上查出测定管浓度。
【注意事项】
1.标本应4℃保存，72h内测定。
2.TAT浓度过高超过60μg/L时，标准曲线不成线性关系，应进行稀释后测定，否则测定结果偏高。
3.显色反应不能太强，TAT标准品的A值达到1.800左右。
4.溶血、脂血、含类风湿因子血浆样品影响结果。
【参考范围】1.0～4.1μg/L。
【临床意义】增高反映了体内凝血酶的生成及抗凝反应激活，见于血栓前期和血栓性疾病。急性心肌梗死患者接受溶栓治疗后，血浆TAT水平仍高于6μg/L应继续治疗，否则可能再次发生心肌梗死。
可用于抗凝和溶栓治疗的监测，肝素和纤溶治疗有效时，血浆TAT水平下降。
（二）凝血酶原片段1+2（F1+2）检测
【原理】用双抗体夹心ELISA法测定。用兔抗人F1+2包被于ELISA固相板上，加入待检血浆，再加入辣根过氧化物酶标记的鼠抗人F1+2抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，洗涤后加入底物显色，显色颜色深浅与F1+2抗原的量呈正相关。
【试剂】具体见试剂盒。
【操作】
1.血浆制备：血浆同凝血酶-抗凝血酶复合物测定。
2.按照试剂盒说明要求操作：包被、加样、酶标抗体、显色、终止、制作回归曲线。
3.以492nm酶标仪读取A值，标准曲线对应值，计算待检血浆Fl+2浓度，乘以稀释倍数。
【注意事项】
1.受检血浆必须以转速3000r/min以上离心分离。
2.每次检测都需做好空白对照，以洗涤液替代血浆加入反应板。如果空白管显色A值超0.100，重新检测。
3.洗涤液要保留3min，甩干，以防止血浆中的多种蛋白造成交叉反应。
【参考范围】0.29～1.05nmol/L。
【临床意义】
1.血浆Fl+2是凝血酶生成的标志 先天性和获得性AT缺乏症、蛋白C缺乏症时明显升高。在DIC、深静脉血栓、肺栓塞、急性白血病也可升高。
2.作为口服抗凝剂的监测指标 口服抗凝剂患者Fl+2减低。
（三）血浆纤维蛋白肽A
【原理】测定血浆纤维蛋白肽A（fibrinpeptideA，FPA）常用ELISA法。皂土处理待检血浆除去纤维蛋白原，待检标本（含FPA）加入过量的已知浓度的兔抗人FPA抗体充分结合，再将此反应后的液体（有剩余的兔抗人FPA抗体）移至预先包被FPA酶标板上，剩余未结合的FPA抗体与固相FPA结合。将液相中抗FPA洗去后，加入过氧化物酶标记的抗体与固相上的抗FPA结合，加入显色剂显色，其颜色深浅与受检标本中的FPA呈负相关。
【试剂】
1.皂土、皂土缓冲液 584mgNaCl与605mgTris共溶于90ml蒸馏水，以浓盐酸调整pH为8.95，加牛血清白蛋白100mg。
2.血浆纤维蛋白肽A检测试剂盒。
3.洗涤液 pH7.4的PBS 1000ml，加0.5mlTween-20，加NaN30.2g。
【操作】
1.血浆制备：同凝血酶-抗凝血酶复合物测定（血浆需要经皂土处理后才能测定）。
2.按照试剂盒说明和要求操作。
【注意事项】
1.采血顺利，最初2ml全血应去除，注射器应硅化或使用塑料制品。
2.待检标本用皂土处理去除纤维蛋白原，必须反复振摇10min以上，重复一次，离心速度不能低于3000r/min。
3.皂土处理过的血浆标本如果不立即检测，可置-20℃保存，集中检测。
4.标准品和受检血浆加抗FPA抗体后，可在4℃环境中过夜。
5.酶标板洗涤要充分，每次洗涤液保持3min。
【参考范围】
女性不吸烟、未服避孕药者为1.20～3.28μg/L。
男性不吸烟者为1.22～2.44μg/L。
【临床意义】
FPA增高说明凝血酶活性增加，见于急性心肌梗死、不稳定性心绞痛、深静脉血栓、DIC、脑梗死、SLE、恶性肿瘤等。FPA在体内半衰期只有4min，因此，FPA是反映即刻状态下的凝血酶活性。
（四）血浆纤溶酶-纤溶抑制酶复合物检测
【原理】测定血浆纤溶酶-纤溶抑制酶复合物（plasmin-antiplasmin complex，PAP）用双抗体夹心ELISA法。首先将纤溶抑制酶抗体包被于酶标反应板，再加入受检血浆，血浆中纤溶酶原-α2-纤溶抑制酶复合物中的纤溶酶原部分与包被抗体结合于固相载体上，加入过氧化物酶标记的α2-纤溶抑制酶抗体，与已结合在包被抗体上的PAP中α-纤溶抑制酶部分结合。加上底物显色，其颜色深浅与PAP含量呈正相关。
【试剂】具体见试剂盒。
【操作】
1.血浆制备：用0.109mol/L枸橼酸钠按1:9制备抗凝血，分离贫血小板血浆。受检血浆用标本稀释液作1:50倍稀释备用。
2.将标准PAP用标本稀释液配制成10μg/ml、5.0μg/ml、2.5μg/ml、1.25μg/ml、0.625μg/ml和0.3125μg/ml。
3.在抗体包被好的反应孔内，分别加各种浓度的标准液和待测稀释血浆100μl。置37℃温育180min。洗涤5次，甩干。
4.加酶标α2-纤溶抑制酶抗体100μl，置37℃温育180min。洗涤5次，甩干。
5.每孔加底物液100μl，室温20min。加2.0mol/L硫酸50μl，终止反应。
6.以波长492nm酶标仪上读取各管A值，以标准管的吸光度为纵坐标，以标准管浓度为横坐标，绘制标准曲线。根据测定管的A值，查标准曲线得到浓度，再乘稀释倍数50后即为最终结果。
【注意事项】
1.包被后要用封闭液处理，这样的反应板可置-20℃保存1个月。
2.本试验因使用纤溶酶原抗体为包被抗体，会出现较明显的非特异性结合而显色，所以终止反应要迅速，尽量避光操作。
3.受检标本PAP含量超出标准品可成的线性范围，可稀释100倍或200倍再检测。
【参考范围】0.12～0.7mg/L。
【临床意义】PAP增高见于血栓前状态和血栓性疾病，溶栓治疗以及白血病、恶性肿瘤、糖尿病和肾病综合征等。血浆PAP是反映纤溶酶活性较好的指标，优于α2-AP。
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