本法所指的重金属系指在实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用显色的金属杂质。《中华人民共和国药典》2010年版规定了三种检查方法，以下介绍最常用的第一法。其检测原理为：在弱酸性溶液中，硫代乙酰胺水解产生硫化氢，与重金属离子作用生成可均匀分散于溶液中的有色硫化物，与一定量标准铅溶液经同法处理后进行颜色比较，达到限度检查目的。
3．3．1 操作步骤
（1）制备对照溶液。取规定量的标准铅溶液（10μg／ml）置于25ml纳氏比色管（甲管）中，加醋酸盐缓冲液（pH 3．5）2ml，再加水或各品种项下规定的溶剂使成25ml。
（2）制备供试品溶液。按各品种项下规定的方法制成供试品溶液25ml置另一25ml纳氏比色管（乙管）中。
（3）制备供试品阳性溶液。取与（2）相同量的供试品，置另一25ml纳氏比色管（丙管）中，加配制供试品溶液的溶剂适量使之溶解，再加与（1）相同量的标准铅溶液与醋酸盐缓冲液（pH 3．5）2ml后，用溶剂稀释成25ml。
（4）显色。上述三管中分别加入硫代乙酰胺试液各2ml，摇匀，放置2min。
（5）观察。上述三管在白色背景下，自上向下透视，观察比较颜色的深浅。
3．3．2 注意事项（图3－2）
（1）正确使用标准铅溶液。经标准铅贮备液稀释配制的标准铅溶液仅供当日使用，以防止硝酸铅水解而造成误差。
（2）正确配制醋酸盐缓冲液。要用pH计调节醋酸盐缓冲液的pH至3．5，以使硫代乙酰胺试液与重金属反应完全。
（3）正确使用硫代乙酰胺试液。硫代乙酰胺试液临用前由4%硫代乙酰胺溶液－混合液（1∶5）混合，置水浴上加热20s，立即使用。混合液1mol／L氢氧化钠溶液－水－甘油（3∶1∶4）组成液。
（4）正确控制显色时间和观察。最佳显色时间为2min，观察时应将纳氏比色管同置于白色衬板上，自上向下透视。
（5）正确选择纳氏比色管。选择比色管时，应注意管的大小一致，玻璃不带任何颜色，管上的刻度高低一致，如有差别亦不得超过2mm。
3．3．3 操作示例
【例】 葡萄糖注射液重金属检查（第一法）。按《中华人民共和国药典》2010年版二部检查。
测定法：
（1）标准铅溶液的制备：称取硝酸铅0．159 9g，置于1 000ml量瓶中，加硝酸5ml与水50ml溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。精密量取贮备液10ml，置于100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml相当于10μg的Pb）。本液仅供当日使用。
图3－2 重金属检查注意事项
（2）检查法：取25ml纳氏比色管3支，甲管中加标准铅溶液1．5ml；另取适量（相当于葡萄糖3g）葡萄糖注射液两份，加热蒸发至约20ml，放凉，分别置于乙管和丙管中，并在丙管加入标准铅溶液1．5ml。再在甲、乙和丙三管中加入醋酸盐缓冲液（pH 3．5）2ml，再加水稀释成25ml。最后在甲、乙和丙三管中分别加硫代乙酰胺试液2ml，摇匀，放置2min，同置于白纸衬底的比色架上，自上向下透视，当丙管中显示出的颜色不浅于甲管时，乙管中显示的颜色与甲管比较，不得更深。
3．3．4 检验记录
检验原始记录中应包括：所采用的方法、供试品取样量、标准铅溶液的来源及取用量、供试管及标准管的制备等信息。表3－3为上例的重金属检查记录。
表3－3 葡萄糖注射液重金属检查原始记录
3．3．5 遇到问题怎么办
（1）问：第一法检查重金属，供试品溶液如有色该怎么办？
答：①可在甲管（标准铅管）中滴入少量稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液，使之与乙管和丙管一致，然后再加硫代乙酰胺试液比色。
②如甲管经调色后仍不能使三管颜色一致时，应取样按第二法检查。
（2）问：重金属检查第二法需注意什么？
答：①炽灼温度应控制在500～600℃。因为温度越高，重金属损失越多，例如铅在700℃炽灼6小时，回收率仅为32%。
②炽灼残渣加硝酸处理后必须蒸干，除尽氧化氮，否则会使硫代乙酰胺水解生成的硫化氢，因氧化析出硫，影响检查。
③为了消除试剂中可能夹杂重金属的影响，在配制供试液时，如使用盐酸氨试液、硫酸与硝酸进行有机破坏或加入其他试剂处理者，除另有规定，对照溶液应取同样量的试剂在磁皿中蒸干后，依法检查。
（3）问：重金属检查第一法，如供试品中含高铁盐，该如何检查？
答：供试品中如有微量高铁盐存在，在弱酸性溶液中可氧化硫化氢析出硫，产生浑浊影响比色，可先在甲、乙、丙三管中分别加入相同量的维生素C 0．5～1．0g，使高铁离子还原为亚铁离子，则不干扰检查。
（4）问：《中华人民共和国药典》2010年版重金属检查法第一法，增设丙管有何意义？
答：2010年版重金属检查法第一法要求做三管，分别为甲管（标准铅），乙管（样品），相比2005年版增设了丙管（标准铅＋样品）。丙管的目的是检查样品对测定有无干扰，因为含芳环、芳杂环等药物，能与铅形成稳定的络合物，而干扰检查结果。
（5）问：重金属检查的三种方法分别适用于什么药物？
答：第一法适用于溶于水、稀酸或乙醇等药物。第二法适用于含芳环、芳杂环以及难溶于水、稀酸或有机溶剂的药物。第三法适用于碱溶性药物。
免责声明：以上内容源自网络，版权归原作者所有，如有侵犯您的原创版权请告知，我们将尽快删除相关内容。
