中药药代动力学研究

10.3.2.1　概述

中药药代动力学是指在中医药理论指导下，利用动力学的原理和数学处理方法，研究中药有效成分、有效部位、单味中药和复方中药通过各种给药途径进入机体后的吸收、分布、代谢和排泄等过程的动态变化规律及其体内时量－时效关系，并用数学函数加以定量描述的一门边缘学科。中药药代动力学研究对于阐明中药防病治病机制和研究开发中药新药具有重要意义。中药药代动力学的研究方法包括血药浓度法和生物效应法。生物效应法是针对有效成分尚不明确的中药及其制剂的药代动力学研究方法，是以药效为指标进行药代动力研究的方法，包括药理效应法、药物累积法和微生物指标法。血药浓度法则是针对有效成分较为明确的中药的药代动力学研究方法。该研究方法是以一种或几种药理作用明确，结构已知的有效成分为指标，测定该成分在血液或其他生物组织中的浓度随时间变化过程，求出药代动力学参数，拟合药物浓度－时间曲线，确定药代动力学模型，以此来反映中药及复方的药代动力学特征。血药浓度法首先要求利用先进的分析手段，建立一个灵敏、准确的测定方法。

中药特别是复方中药由于成分复杂，一个中药复方中常常包含几百种成分，而每种成分含量很低。当采用口服给药的方式时，由于有些成分在肠道吸收量少，这些成分在体内的浓度就更低了，需要灵敏度高、准确度高的分析方法才能满足这些中药成分的体内分析要求。随着HPLC、LC－MS等现代分析技术特别是LC－MS广泛使用，使得中药药代动力学的研究在近年来得以飞速发展。中药药代动力学的研究内容包括:中药成分的血药浓度－时间曲线研究、药代动力学参数、中药成分的吸收分布研究、中药成分的代谢研究、中药成分的排泄研究等。

进行中药药代动力学研究的基础是建立准确测定中药成分的体内分析方法，这些方法包括HPLC法、LC－MS法、HPCE法等，根据具体待测成分的特点选择合适的方法，特别是建立同时测定多种中药成分的体内分析方法。其样品处理的条件、色谱条件和检测条件的选择根据具体情况具体分析。进行样品处理时，要注意防止处理过程中成分的损失，以免回收率降低。选择紫外检测波长的时候，如果是多种成分同时测定，可以考虑采用程序波长检测，以兼顾各类成分的最大吸收波长，提高检测灵敏度。

10.3.2.2　应用实例

实例:大鼠灌胃四物汤后白花素和芍药苷的药代动力学研究

四物汤由当归、白芍、地黄和川芎组成，具有补血、活血和调经止痛作用。白花素(albiflorin)和芍药苷(paeoniflorin)是白芍的主要成分(结构见图10－23)，也是四物汤的主要成分和标志性成分。Sheng等采用高效液相色谱法建立了同时测定大鼠血清中白花素和芍药苷含量的方法，并研究了大鼠灌胃四物汤提取物后白花素和芍药苷的药代动力学。

(1)色谱条件:色谱柱为Inertsil ODS－3 C18反相色谱柱(5μm，250 mm×4.6 mm，Dikma)，RP18(5μm，Dikma)，柱温25℃。采用等度洗脱，流动相为0.03%甲酸－乙腈［83 17(v/v)］，流速1 mL·min－1。检测波长230 nm。

图10－23　白花素(a)和芍药苷(b)的结构

(2)样品处理:采用固相萃取法进行血清样品处理。Extract－CleanTM固相小柱，小柱临用前用甲醇和去离子水进行预处理。将含有白花素、芍药苷和内标己酮可可碱的血清样品上样，然后用去离子水冲洗固相小柱，再用60%甲醇将样品中的上述化合物洗脱下来，洗脱液30℃真空干燥，残渣用240μL流动相溶解，取20μL进样分析。

(3)方法学验证:在上述色谱条件下，白花素、芍药苷和内标的保留时间分别为10.30 min、12.26 min和22.37 min，内源性物质不干扰测定(图10－24)。白花素和芍药苷的定量范围分别为29～1450μg·L－1和10～2000μg·L－1，最低定量限分别为29μg·L－1和10μg·L－1，标准曲线分别为Y=0.001476X+0.011465(r2=0.9944)和Y=0.00133X+0.065101(r2=0.9961)(Y为峰面积笔，X为浓度)。白花素和芍药苷的平均萃取回收率分别为89.75%和85.82%。白花素(浓度为58μg·L－1、145μg·L－1、725μg·L－1、1450μg·L－1)的日内准确度和日间准确度分别为92.55%～94.43%和90.45%～92.89%;日内精密度和日间精密度(RSD)分别小于9.93%和10.49%。芍药苷(浓度为40 ng·mL－1、200 ng·mL－1、800 ng·mL－1、1400 ng·mL－1)的日内准确度和日间准确度分别为95.40%～109.82%和96.01%～100.3%。日内精密度和日间精密度(RSD)分别小于11.29%和10.88%。

(4)药动学研究:大鼠灌胃四物汤提取物后，分别于5 min、10 min、15 min、20 min、40 min、60 min、120 min、180 min、240 min取血，血样30 min后离心分离血清。血清样品置于聚丙烯管中－20℃保存。血清样品加入内标按上述样品处理方法处理并测定其中的白花素和芍药的苷浓度。白花素和芍药苷的药物浓度－时间曲线见图10－25。药动学参数采用3P97程序处理。白花素和芍药苷的t max分别为13.77±0.23和19.36±10.34min，Cmax分别为1014.36±21.41和1784.74±53.50μg·L－1，AUC0－∞分别为36915.01±429.18和68423.41±1333.29，T1/2分别为43.71±1.74 min和63.69±10.26 min，MRT分别为56.86±1.72 min和93.32±18.06 min。

图10－24　代表性的色谱图

(a)空白血清;(b)空白血清加入标准品;(c)大鼠给予四物汤后的血清样品
1—白花素;2—芍药苷;IS—内标

图10－25　大鼠灌胃给予四物汤后血清中白花素和芍药苷的药物浓度－时间曲线