均相酶免疫分析

EIA法包括均相酶免疫分析和非均相酶免疫分析。其中，均相酶免疫分析技术主要用于小分子激素和半抗原测定分析，因此在体内药物分析中更为常用。均相酶免疫分析最具代表性的两种分析技术是酶放大免疫测定技术(Enzyme－multiplied immunoassay technique，EMIT)和克隆酶供体免疫分析(Cloned enzyme donor immunoassay，CEDIA)。

EMIT法是Rubenctein等人于1972年提出的。其反应机理是标记药物和未标记药物与抗体的竞争性结合。具体来说就是酶和底物反应可生成有色产物，当酶标药物和抗体结合后，酶标药物－抗体复合物中酶催化部位由于抗体的空间位阻作用而失活，导致有色产物量减少。因而可以通过用紫外－可见分光光度计测定溶液吸光度从而测得药物浓度。

EMIT法最常用的标记酶是6－磷酸葡糖糖脱氢酶和苹果酸脱氢酶。用6－磷酸葡糖糖脱氢酶标记的EMIT法是利用标记在药物上的6－磷酸葡糖糖脱氢酶能在辅酶I(NAD)的作用下将6－磷酸葡萄糖氧化成6－磷酸葡糖酸，NAD被还原为NADH，同时相应吸收光谱发生变化。NADH在340 nm处有最大吸收，但是NAD却几乎无吸收。因此可以利用药物浓度与340 nm处吸收度的变化建立标准曲线，测定样品浓度。苹果酸脱氢酶标记抗原后，其酶活性会受到抑制，但与抗体结合形成抗原－抗体复合物后，酶的活性又会恢复。因此酶标药物和抗体结合后能和底物发生反应，生成有色产物，同样通过测定溶液吸收度和药物浓度建立标准曲线后来测得药物的浓度。

CEDIA法也是常见的均相酶免疫分析方法。DNA重组技术可分别合成β－D－半乳糖苷酶的两种片段，大片段称为酶受体(EA)，小片段称为酶供体(ED)。单独EA和ED均无酶活性，但在一定条件下可结合成具有酶活性的四聚体。CEDIA法是用ED标记抗原，反应体系中的抗原和ED标记的抗原会与特异性抗体竞争结合，其中ED标记的抗原与抗体结合后由于空间位阻，不再能与EA结合。反应平衡后，剩余的ED标记抗原与EA结合，形成具有活性的酶，加入底物测定酶活力，酶活力的大小与标本中抗原含量呈正比。同样可以通过建立标准曲线来得到药物的浓度。