血浆皮质醇测定

一、概 述

糖皮质激素(glucocorticoid,GC)是由肾上腺皮质中束状带分泌的一类甾体激素,主要为皮质醇(cortisol)。GC主要作用是调节糖、蛋白质、脂肪代谢,促进糖异生,增加肝糖原和肌糖原含量;又抑制除脑和心肌外的其他组织对葡萄糖的利用,从而升高血糖。对蛋白质代谢,GC抑制蛋白质合成,促进除肝外的多种器官组织蛋白质分解,从而升高血氨基酸及尿素。在脂肪代谢上,GC可诱导四肢皮下组织脂肪酶表达,促进这些部位的脂肪分解,血脂肪酸升高。

正常人平均每天分泌皮质醇15～30mg。血浆皮质醇的半衰期80～120min。在24h内,其分泌有节律变化:一般上午6:00～8:00时最高,下午逐渐降低,晚上10:00至次日凌晨2:00为最低。

二、病人准备

1.药物

(1)一般用于治疗动脉硬化、卒中、脂类代谢失常、高血压、冠心病和血液循环障碍性疾病的药品中均含有生物素,而电化学发光免疫分析法的试剂中有生物素化的抗体参与,因此,接受高剂量生物素(>5mg/d)治疗的病人,至少要等最后1次摄入生物素8h后才能采血。

(2)应用糖皮质激素(地塞米松,泼尼松龙等)会出现假性皮质醇升高。

(3)妊娠、使用避孕药和雌激素治疗会导致测定结果不准确。

2.饮食 试验前10～12h禁食,摄食1h后皮质醇水平会升高,午餐后平均升高90%,晚餐后平均升高大约50%。

3.影响因素

(1)尽可能使受试者保持安静状态,心情平静,无任何应激反应时,进行试验。引起皮质醇浓度升高的因素有体力活动、精神紧张、各种急性病、手术、感染、饥饿、抑郁症、神经性厌食、饮酒、吸烟、过度劳累和慢性肝肾疾病等,受热、灯光和活动可影响皮质醇的节律变化,应注意避免。

(2)皮质醇浓度受类固醇结合球蛋白(CBG)的影响,使CBG升高的因素包括妊娠、肥胖、甲状腺功能亢进症和雌激素治疗,使CBG降低的因素包括甲状腺功能减退症、多发性骨髓瘤和先天性CBG缺乏。

(3)美替拉酮试验可导致11-脱氧皮质醇升高,由于交叉反应可出现假性皮质醇升高。

三、标本采集

1.采集时间 采血前静坐半小时,早8:00空腹、下午16:00、子夜零点分别3次定时取静脉血,由于皮质醇在血中的含量呈现昼夜的周期性变化,应注明采血时间。

每次采集静脉血2 ml于抗凝管(或普通试管)中,立即送检。

2.标本保存 常规方法采集血清或血浆(EDTA、肝素或枸橼酸钠),但是枸橼酸钠抗凝的血浆,测定的结果需+10%。

如不当天测量,可将样本密封后,置于2～8℃保存但不应超过1周,一般不建议-20℃保存,因为复融后皮质醇浓度可因变性的蛋白沉淀而降低。

四、注意事项

1.由于皮质醇在血中的含量呈现昼夜的周期性变化,必须注明采血时间。

2.分析结果时应注意标本采集时间、用药情况、疾病状态、采血姿势、生活习惯(如吸烟及咖啡因的影响)以及昼夜节律。

3.严重的应激反应会导致皮质醇升高。

五、试验方法及正常参考范围

1.放射免疫分析法 应用竞争机制原理,标准或样品中的皮质醇和加入的125 I-GC共同与一定量的特异性抗体产生竞争性免疫反应。125 I-GC与抗体的结合量与标准或样品中GC的含量呈一定的函数关系。用免疫分离试剂(PR)将结合部分(B)与游离部分(F)分离后,测定结合部分的放射性强度,并计算相应结合率B/B0。用已知标准GC含量与对应结合率作图,即得标准抑制曲线。从标准曲线上查知对应结合率的待测样品中GC的含量。

2.化学发光免疫分析法 采用竞争试验原理,即待测抗原(F)与过量的碱性磷酸酶标记抗原(ALP-F)在反应体系中竞争性地结合特异性F抗体(Ab)的结合位点。检样中F和ALPF与Ab进行竞争性结合反应,由于ALP-F和Ab为一定量的,检样中F的量越多,ALP-F-Ab的量就越少。当反应达平衡时,反应系统中光子的产出量与ALP-F-Ab的量成正比,而与F的含量成反比。

正常参考范围　上午8:00:0.17～0.44μmol/L

　　　　　　　下午16:00:0.06～0.25μmol/L

3.电化学发光免疫分析法 待测抗原(F)、钌标记的F竞争性地与生物素化的抗F单克隆抗体结合,待测抗原的量与钌标记的F和生物素化的抗F单克隆抗体所形成的免疫复合物的量成反比。加入链霉亲和素包被的磁性微粒捕获该免疫复合物,在磁场的作用下,磁性微粒被吸附至电极上,吸弃各种游离成分。电极加压后产生光信号,其强度与检样中一定范围的F含量成反比。

正常参考范围　上午7:00～10:00:171.0～536.0 nmol/L

　　　　　　　下午16:00～20:00:64.0～340.0nmol/L,凌晨更低。

六、临床意义

1.用于功能动力试验,如小剂量和大剂量地塞米松抑制试验。

2.了解皮质醇分泌的节律变化。

3.监测下丘脑-垂体-肾上腺轴的情况。

4.血浆皮质醇增高。主要见于库欣综合征,此系肾上腺皮质增生,肾上腺癌等肾上腺自身疾病引起,亦可能为垂体嗜铬细胞分泌过量的ACTH刺激肾上腺皮质引起。

5.血浆皮质醇降低。主要见于艾迪生病(原发性肾上腺皮质功能减退),席汉综合征(继发性肾上腺皮质功能减退)和先天性肾上腺皮质增生等。