微柱凝胶血型鉴定法

【目的】正确掌握ABO/Rh D血型鉴定方法。

【方法】微柱凝胶法。

【标本】受检者EDTA抗凝全血。

【试剂】

1.ABO/Rh D血型定型检测试剂卡。

2.5%A、B反定型试剂红细胞悬液。

【器材】血型血清学专用离心机、加样枪、试管、滴管。

【操作步骤】

1.操作前准备:戴口罩、帽子、手套,穿工作服,准备并清点本试验所需器材。

2.ABO、RhD血型抗原检测卡(微柱凝胶)有6个凝胶孔。其中第1孔为抗A凝胶,第2孔为抗B凝胶,第3孔为抗D凝胶,第4～6孔为中性胶。

3.将受检者红细胞配制成0.8%～1%红细胞盐水悬液,分别加入第1、第2、第3、第6孔中,每孔50μl。

4.将A、B反定型试剂红细胞悬液配制成0.8%～1%红细胞盐水悬液,分别加入第4、第5孔中,每孔50μl。

5.将受检者血浆分别加入第4～6孔中,每孔25μl。

6.将已加好反应物的凝胶卡垂直横向竖立在台面上,轻叩卡的左右边缘混匀加样槽中的血浆(或血清)与红细胞后,置专用血型血清学离心机离心5min。

7.观察判定结果并记录(图3-7和表3-4)。

图3-7　微柱凝胶卡结果分析

表3-4　微柱凝胶卡血型鉴定判定

注:“+”为阳性 “-”为阴性

8.若ctr孔呈阳性结果,该试验无效,需进一步查明原因。

9.操作后正确处理医疗垃圾,实验器材归回原位。

【注意事项】

1.凝胶卡使用前应使用离心机离心。

2.若凝胶卡封口开裂、孔中凝胶干涸或有气泡,不可使用。

3.撕开凝胶卡封口膜时,不能用力过猛,以免造成凝胶微孔间的交叉污染。

4.红细胞悬液的浓度为0.8%～1%,浓度过高或过低会影响检测结果。

5.样本采集后应尽快检测,若试验需要延迟,应将样本置2～8℃下短期储存。

6.如在微柱凝胶孔中出现溶血现象,提示为红细胞抗原抗体阳性反应,也不排除其他原因所致溶血,应对此样本认真检查分析原因,并及时向上级主管技术人员报告样本试验情况并分析原因。

7.若样本被细菌污染,可能出现假阳性反应。

8.异常纤维蛋白的存在会吸附部分红细胞,导致假阳性反应,应将血浆样本离心去除纤维蛋白。

9.Ig M抗D不能鉴定弱D,部分D抗原,当出现阴性结果时,如需确诊须做进一步检查。

10.人源血液样本存在潜在的传染性,凝胶卡使用后按生物垃圾处理。

【技能要点】

1.严格按照操作步骤规范操作。

2.结果判读正确。

(邵智利　陈　静)