涂片--基因检测

癌基因C-erbB-2是已知和乳腺癌预后有关的生物学因子。近来很多报道说明C-erbB-2在乳腺癌中的过度表达与癌的分化、组织学类型、对内分泌治疗的反应及病人的预后因素有关。

（一）FNAC涂片HE染色后的免疫细胞化学染色

陈婉娴等于2002年对FNAC涂片HE染色，行免疫细胞化学染色，行C-erbB-2基因检测。

1.材料疑为恶性乳腺肿瘤患者，行细针吸取涂片，经HE染色后做C-erbB-2检查。

2.试剂来源C-erbB-2抗体，来自于Dako公司。

3.方法

（1）将乳腺肿物针吸细胞材料涂于APBS处理过的玻片上，及时固定于95%乙醇液中。

（2）HE染色，行细胞学诊断后，选取合适的涂片，浸入二甲苯中脱盖玻片。

（3）各级乙醇清洗至水。

（4）高压锅做抗原修复处理，pH6.0枸橼酸缓冲液2min或pH5.0EDT缓冲液中1.5min。

（5）冷却后置于3%过氧化氢甲醇液中8min。

（6）用ABC法进行免疫组织化学染色，DAB显色。

4.结果

在胞质中可见C-erbB-2褐色阳性物质。

5.注意事项:染色时应有阳性组织切片对照，注意全过程避免发生干燥。不经过抗原修复的涂片效果不理想。若经过抗原修复程序处理过的细胞学涂片原为阴性者可呈阳性，且阳性细胞增加。阳性物质清晰明确。

（二）细针穿刺乳腺癌肿物涂片行C-erbB-2蛋白检测

1.材料和方法

（1）用10ml无菌注射器、7号针头对乳腺肿物进行穿刺，将吸出物推入盛有1640培养液的EP管内。

（2）500r/min离心2～3次后，用1640培养液洗涤2～3次。

（3）除去红细胞及坏死组织，余0.2ml细胞悬液用离心涂片机涂片。

（4）涂片自然干燥后，用丙酮固定。

2.免疫组织化学染色注意事项 免疫细胞化学染色采用LSAB法。

（1）抗C-erbB-2蛋白为多克隆抗体（DAKO公司产品，1∶100稀释）。

（2）每一例均用组织切片LSAB免疫组织化学染色作为对照。

（3）只记录单个或单层成团的瘤细胞（炎性细胞、坏死细胞和成堆的瘤细胞不记录）。

（4）细胞膜内出现深于背景的棕黄色颗粒即为阳性细胞。

（5）若阳性细胞数>20%者即为阳性。