【组织固定】
1.固定液的选择 进行组织学检查，一般用4%甲醛（即10%福尔马林）溶液，但是肾活检标本常常需要进行多种特殊检查及染色，因此应选择一种能够适用于各种特殊染色的固定液。升汞－苦味酸混合固定，不但可以进行常规染色和各种特殊染色，还可进行酶标抗体染色。
2.固定要求 肾活检取得标本后，立即平铺在小蜡板上，迅速以锋利的刀片将组织按规定分配，并立即用固定液固定标本。如用戊二醛固定，固定时间最好不超过2h；如为多聚甲醛固定，时间稍长无妨。
3.固定液配制
（1）升汞－福尔马林（用时将a、b液混合，摇匀）
a.饱和氯化汞 4.5ml（1%NaCl）
b.甲醛 0.5ml
（2）取2.5ml Db液，配方如下：
80%饱和苦味酸乙醇溶液 25ml
纯乙醇 220ml
甲醛 120ml
蒸馏水 50ml
组织取好后，先放入升汞－福尔马林液中10min左右，再将组织取出，放入Db液中固定。
【前期处理】
1.脱水处理
75%乙醇 10min×2次
90%伊红乙醇 10min
95%乙醇 10min
优质无水乙醇 10min×2次
2.透明 用擦镜纸将组织包埋后，放入氯仿中10min×2次。
3.浸蜡
蜡缸Ⅰ 30min
蜡缸Ⅱ 60min
4.包埋
5.切片
（1）普通切片：厚度为1～2μm，烤片温度为60℃，时间10min。
（2）银染切片：厚度与普通切片相同，烤片温度需90℃，时间为40min。
【苏木精－伊红染色（HE染色）】
HE染色是观察组织病变与否的最基本染色。
1.切片常规脱蜡入水。
2.苏木素染细胞核1～2min。
3.水洗后1%盐酸分化（过一下）。
4.流水冲洗，镜下观察细胞核已经染成蓝色，其余组织呈灰色。
5.放置伊红染液中20min左右。
6.如基底膜偏红可在75%乙醇缸中过一下。
7.乙醇脱水，二甲苯透明，封片。
苏木素染液配制：将苏木素溶于乙醇，倾入明矾液中，混合后蒸沸，加入一氧化汞1.0g，用玻棒搅拌均匀，当溶液呈深紫色时，立即移入冷水中，促使冷却，静置过夜，过滤封闭保存，用前若加5%醋酸则染色更佳。一般新鲜配制时染2～5min。
苏木素 0.9g
氧化汞 0.5～1.0g
纯乙醇 10ml
HAC 12～13ml
硫酸铝钾铵（钾明矾） 20g
甘油 10ml／100ml
蒸馏水 200ml
伊红乙醇配制：将伊红溶解后，用滴管滴入醋酸使呈糊状，加数升蒸馏水即可过滤，将滤出的沉渣在烤箱中烤干，溶于95%乙醇200ml中，即可用。
伊红（曙红Y） 1.0g
蒸馏水 10ml
【PAS染色】
过碘酸－席夫染色（PAS染色）将肾小球基底膜、肾小管基底膜以及系膜基质染成紫红色。
1.切片常规脱蜡入水。
2.1%过碘酸氧化15min。
3.水洗后，过蒸馏水。
4.放置席夫试剂（Schiff试剂）染色5～10min。
5.流水冲洗10min以上（观察组织由淡红色转为玫瑰红色）。
6.苏木素淡染30s～2min。
7.水洗蓝化（必要时分化）。
8.乙醇脱水，二甲苯透明，封片。
席夫（Schiff）液配制：将蒸馏水煮沸冷却至80℃，溶入碱性品红，冷却后过滤，至60℃时加盐酸，25℃时加偏重亚硫酸钠，黑暗中储放过夜，加入药用炭，摇1min后过滤，4℃暗色瓶中备用。
配方：碱性品红1g、偏重亚硫酸钠2g、1mol／L（1N）盐酸20ml、药用炭2g、蒸馏水200ml。
【马森三色染色】
马森（Masson）三色染色将细胞核染成黑色，胞浆及胶原纤维染成蓝绿色，蛋白、免疫复合物染成橘红色。
1.切片常规脱蜡入水。
2.天青石蓝染细胞核10min，水洗蓝化。
3.1%醋酸水溶液1min。
4.马森（Masson）红染液10min左右。
5.1%醋酸水溶液1min。
6.0.5%亮绿，光镜下控制，使肾小球基底膜变绿。
7.快速脱水（甩片），透明封片。
马森（Masson）红染液配制：
变色酸2R（chicmolocps 2R） 0.6g
亮绿SF 0.3g
蒸馏水 100ml
磷钨酸 0.8g
冰醋酸 1.0ml
【PAM染色】
PAM染色将肾小球基底膜、肾小管基底膜以及系膜基质染成黑色，而免疫复合物染成红色。
1.切片常规脱蜡入水。
2.脱汞：30%含碘（3%）乙醇5min。
3.脱碘：5%硫代硫酸钠5min。
4.蒸馏水冲洗7～8次。
5.六胺银染色，75℃，30～45min。
6.蒸馏水冲洗。
7.3%硫代硫酸钠2～5min。
8.清水冲洗。
9.1%醋酸中过一下。
10.混合红1h。
11.1%醋酸水洗。
12.1%淡绿，光镜下控制。
13.快速脱水（甩片），透明封片。
六胺银液配制：用时现配
预温蒸馏水 23ml
5%硼砂4.5ml
4%硼酸0.2～0.4ml
15%六次甲基四胺6ml
10%硝酸银0.7～0.75ml
混合红液配制：马森（Masson）红染液中加入少许1%酸性品红，比例需染片后定。
【MSB染色】
细胞核呈黑色；红细胞呈黄色；蛋白呈红色；结缔组织呈蓝色。
1.切片脱蜡入水。
2.用天青蓝染细胞核。
3.水冲洗。
4.分化核（试剂：分化液中含0.25%盐酸，70%乙醇）。
5.水冲洗。
6.过95%乙醇，然后用0.5%马休黄染［0.5%马休黄（martius yellow），95%乙醇，2%磷钨酸］2min。
7.蒸馏水洗，然后用1%丽春红6R（brilliant crystal scarlet，1%丽春红6R，2.5%醋酸）染色10min。
8.用蒸馏水冲洗，再用1%磷钨酸做固定分化红色染料5min。
9.0.5%苯胺蓝（soluble blue，0.5%苯胺蓝，1%醋酸）染10min。
10.1%醋酸洗，吸干，纯乙醇脱水，二甲苯透明，封片。
【高锰酸钾－碱性刚果红染色】
细胞核蓝色，淀粉样物质呈淡红色。
1.切片脱蜡入水。
2.高锰酸钾－硫酸混合液（5%高锰酸钾，0.3%硫酸，用时现配，等量混合）处理3min，水洗。
3.5%草酸3min，水洗。
4.苏木素染核2min，水洗，蓝化。
5.碱性刚果红液（1%NaOH 0.3ml，80%乙醇氯化钠刚果红饱和溶液30ml）中10～20min。
6.快速脱水，透明，封片。
注意：切片厚度以4～6μm为好。
此种染色是在碱性刚果红染色（去掉第二和第三两个步骤）阳性基础上进行的，以此辨别蛋白的性质：经高锰酸钾处理后依然阳性的切片为AL蛋白沉积；阴性的切片为AA蛋白沉积。
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