浸泡消毒效果监测

【监测准备】

1.人员和设备　执行监测的人员需经过专业培训，掌握一定消毒知识，熟悉消毒设备和药剂性能，具备熟练的检验技能，执行规范规定的监测技术。

2.实验室准备　试验在具备合格的微生物专用试验室内进行，常规监测可用普通生物实验室，做无菌试验则需要在具有100级洁净条件的实验室或超净工作台内进行。实验室设备主要有洁净工作台、恒温培养箱、冰箱、压力蒸汽灭菌器、恒温水浴器等。各种无菌器材，如培养皿、试管、吸管等，采样用棉拭子等器材必须经过压力蒸汽灭菌。

3.培养液准备　普通营养培养液，必要时需要厌氧培养液如硫乙醇培养液，沙堡培养液等特殊培养液，如做无菌定性培养尚需要营养肉汤管。

4.中和剂准备　化学消毒剂处理过的各种采样标本必须经过中和作用，方可做微生物检验，不同消毒剂所对应的中和剂详见表27-1。

表27-1　化学消毒剂的常用中和剂

注：配制各种中和剂均使用磷酸盐缓冲液（PBS）为基础溶剂

【采样时机】

1.消毒物品采样　考察消毒或消毒效果应该是在物品放入消毒液内作用到规定时间之后进行采样，不得在物品刚放入即进行采样；到被监督单位抽样应在达到之后等到一个作用时间周期或经过使用人员认可的作用时间进行采样。

2.使用中消毒液采样　采集消毒液样品做污染菌数检查应在消毒液内没有物品或放入物品作用到规定时间之后进行采样。

【采样方法和培养方法】

1.检查无菌试验室消毒效果　在无菌试验室用无菌操作方法进行采样，浸泡的小件器械如缝合针、针头、刀片等取5件以上，直接放入盛有5～10ml中和剂的试管内，每个试管内放1件，作用10min后，于振荡器上震荡1min或敲打80次，吸取0.5ml接种到营养肉汤内。手术钳等大件器械用无菌棉拭子蘸中和剂挤干，对器械表面作反复涂擦，将棉拭子头投入中和剂内，亦按上述处理之后接种肉汤，于37℃温箱内培养连续1周。

2.检查现场消毒效果　可以在现场采样但必须按无菌操作程序，采样方法与上述相同。将采样标本试管敲打80次，必要时可做适当稀释，按“活菌计数法”取洗脱液接种。用涂抹法接种，吸取洗脱液0.2ml接种到事先准备好的营养琼脂平板表面，用L棒均匀涂干；用倾注法接种，吸取洗脱液0.5ml接种到无菌平皿内，倒入已熔化的营养琼脂与约20ml，边倒边混合，待凝固之后将平板（涂抹法也如此）反转倒置于37℃温箱内培养24～48h观察结果。

3.检查使用中的消毒液　用无菌吸管吸取消毒剂溶液1.0ml，加入到9.0ml中和剂内混匀作用至少10min，可分别用上述“涂抹法或倾注法”进行接种，一式2份，一份置于30℃温箱内连续培养1周，另一份置于37℃温箱内培养连续培养3d，每天观察并记录菌落数。结果判定：

涂抹法计算染菌数（cfu／ml）＝平板上平均数菌落数×50。

倾注法计算染菌数（cfu／ml）＝平板上平均菌落数×20。

按《消毒技术规范》规定，使用中消毒液染菌量≤100cfu／ml并检不出致病菌为合格。