【目的】 观察肾上腺素、氨茶碱、乙酰胆碱、组胺等药物对豚鼠离体气管条的作用,加深了解引起支气管收缩和扩张支气管的常见化学介质和药物。
【原理】 离体组织在适宜的条件下,仍能保持正常兴奋性。不同的药物通过直接或间接激动不同的受体可使离体气管条产生收缩或松弛作用。由于豚鼠的气管对药物的反应敏感,其生理特性接近人类,故常用于观察气管药物反应的标本。
【材料】 豚鼠,体重300g左右;恒温浴槽,计算机生物信号采集处理仪,张力换能器,超级恒温器,手术器械一套、培养皿、注射器(1ml)、烧杯、木锤、丝线;1∶10 000肾上腺素溶液、0.5%阿托品溶液、2.5%氨茶碱溶液、1∶10 000普萘洛尔溶液、1∶2 000乙酰胆碱溶液、0.2%组胺溶液、台氏液、95%O2+5%CO2的混合气体。
【方法】
1.离体气管条标本的制备
(1)豚鼠用木锤击昏或用20%氨基甲酸乙酯按5ml/kg体重腹腔注射麻醉,放血致死,迅速于腹面正中切开颈部皮肤,分离气管,并自甲状软骨下至气管分叉处剪下全部气管,立刻置于氧饱和台氏液的培养皿内。
(2)在气管软骨面纵行剪开气管,再以2~3个软骨环的间隔横向剪断(可将取下的气管平分成8~9片),在气管片的纵切口处用缝线连上,相互连接3~4片为一气管标本(图6-1)。用棉签轻轻地在气管的内膜面擦拭以去除内膜。
(3)将气管片标本的下端用线固定于固定架上,标本的上端将线与张力换能器连接,立刻将标本放入已恒温37℃并通混合氧的10ml台氏液的浴槽内。
图6-1 气管标本制备步骤
2.仪器连接 将张力换能器固定于铁支柱上,换能器输出线接计算机生物信号处理仪第1输入通道,调节标本上端线的紧张度,使初始负荷为1g。麦氏浴槽中充以台氏液至固定水平面,调节超级恒温器的温度至37℃,保证麦氏浴槽内37±0.5℃恒温。通气管接入混合气体(95%O2+5%CO2混合气体),用螺丝夹调节通气管气流,通气速度以麦氏浴槽中的气泡一个个逸出为宜。
3.仪器参数设置
(1)RM6240C系统仪器参数:张力换能器输入通道选用张力记录模式,时间常数为直流,滤波频率10Hz,灵敏度1.5g,采样频率100Hz,扫描速度:25s/div。
(2)MedLab系统仪器参数:张力换能器输入通道信号名称为张力,放大倍数200~500、下限频率DC、上限频率10Hz,采样间隔5ms。
【观察项目】 标本在浴槽中约稳定30min后,按下列顺序给药:
1.加入1∶10 000肾上腺素溶液0.1ml,待药物作用明显后更换台氏液3次。
2.加入1∶10 000普萘洛尔溶液0.1ml,随即加入1∶10 000肾上腺素溶液0.1ml,记录张力变化曲线。待作用明显后,更换台氏液3次。
3.加入0.2%组胺溶液0.1ml,待作用明显后再加入2.5%氨茶碱溶液0.1ml,记录张力变化。待作用明显后,更换台氏液3次。
4.加入0.2%组胺溶液0.1ml,待作用明显后再加入0.5%阿托品溶液0.1ml,记录张力变化。待作用明显后,更换台氏液3次。
5.加入1∶2 000乙酰胆碱溶液0.1ml,待作用明显后再加入0.5%阿托品溶液0.1ml,记录张力变化。待作用明显后,更换台氏液3次。
6.加入1∶2 000乙酰胆碱溶液0.1ml,待作用明显后再加入2.5%氨茶碱溶液0.1ml,记录张力变化。
【注意事项】
1.由于气管平滑肌比较脆弱,在整个实验过程中须避免拉扯。
2.每次更换台氏液的目的是用该液冲洗标本,待张力基本恢复正常后再行下一步实验。
3.冲洗后加入的台式液量为10ml,并避免药物直接加在标本上。
4.供氧充分,以保持标本活性。
5.不得粗暴地对待实验动物,并在标本制作完成后妥善处理动物尸体。
思考题
肾上腺素、氨茶碱、阿托品等药在豚鼠气管条所显示的作用有何临床意义?其作用机制是什么?
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