微生物学检验

（一）临床标本采集和处理

1．标本采集 ①早期采集：病程早期、急性期或症状典型时进行采集，必须在使用抗生素或其他抗菌药物之前；②无菌采集：采集的标本应无外源性污染。采集的标本均应盛于无菌容器内，盛标本的容器须经高压灭菌、煮沸、干热等物理方法灭菌，或用一次性无菌容器，不能用消毒剂或酸类处理；③根据目的菌的特性用不同的方法采集；④采集适量标本：采集量不应过少，有代表性，在不同时间采集不同部位标本，如肠热症患者，发病的第1周应采集血液，第2周应采集粪便和尿液；⑤安全采集：采集时要防止皮肤和黏膜正常菌群的污染，也要注意安全，防止传播和自身感染。

2．标本处理 对环境敏感的细菌如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和脑膜炎奈瑟菌等应保温并立即送检，其他标本采集后最好在2h之内送到实验室。若不能及时送检，标本应置于一定环境中保存，如痰、尿、尸检组织、支气管洗液、心包液等标本应保存在4℃环境中，滑膜液、脑脊液等则要在25℃保存。一般情况下，用于细菌培养的标本保存时间不应超过24h。

病人标本中可能含有大量致病菌，须注意安全防护。标本勿污染容器的瓶口和外壁，须包装好，防止送检过程中倒翻或碰破流出。烈性传染病标本运送时要特别严格，按规定包装，专人运送。厌氧性标本放在专门的运送瓶或试管内运送，也可直接用抽取标本的注射器运送。

（二）微生物学检查

1．直接镜检 标本经涂片染色或制备湿片镜检，有些标本如尿液、脑脊液等经过离心浓缩后镜检，其初步结果有些有诊断参考价值。直接镜检对于确定进一步检验步骤及鉴定方法也很有帮助，还可评价标本是否符合检验要求。

2．快速诊断 ①特异性抗原检测：用已知抗体检查标本中的未知抗原，包括免疫荧光技术、胶乳凝集试验、酶免疫技术、对流免疫电泳、化学发光免疫测定法等；②核酸检测：用核酸探针杂交和PCR技术快速检出病原微生物；③其他：气－液相色谱法、化学发光法和生物发光测定法。

3．直接药敏试验 在分离培养病原体同时，直接将临床标本接种于平板，用抗生素纸片做药物敏感性试验，在18～24h内可获得结果，该法的优点为快速，接种标本后次日即可发出报告；不足之处在于试验时接种量难以标准化，且对混有杂菌和混合感染的标本不易明确其结果，故分离出纯培养物后应再做体外药物敏感试验。对正常无菌部位采集的血、尿、脓等标本，其直接药敏试验的可靠性较好；在有正常菌群部位采集的标本，除非显微镜检查提示为单一病原菌感染外，一般不做直接药敏试验。

4．常规检验 ①分离培养：由正常无菌部位采取的标本接种血平板，置于空气或含5%～10%CO2的环境中培养，对于存在正常菌群部位采集的标本，分离时应采用选择培养基以利于病原菌生长，也可加某些抗生素抑制污染菌的生长；②鉴定：分离出的细菌一般应经过细菌形态、菌落特点、生化反应、血清学试验、动物接种等鉴定；③体外纯菌药物敏感性试验：常用方法包括抑菌试验、杀菌试验、联合药敏试验和检测细菌产生的抗生素灭活酶等。

5．报告 直接镜检应2h内报告结果，说明标本是否合格，发现微生物情况和特点；初步分离鉴定和直接药敏结果于24h或次晨报告可能的病原菌和直接药敏试验结果；除血培养外，所有送检标本必须在24h内预报；对需要进行的补充试验在24h内先做预报；48h内最后报告分离鉴定和抗生素敏感试验结果；厌氧菌于48h预报有关结果，经鉴定和抗生素药敏试验后争取4d内最后报告。

（三）血清学诊断方法及对应疾病的举例

在做血清学诊断时，一般要在病程早期或恢复期分别采血清标本2～3份检查，抗体效价呈4倍或以上增长才有价值。除非检测IgM，单份血清一般诊断意义不大。

（四）临床微生物实验室感染来源及感染性废弃物的处理

1．实验室感染来源 ①微生物气溶胶；②接触感染材料；或使之附着于衣服带出室外；以及其他偶然事故如菌液滴落于物体表面，注射时不慎刺破皮肤等。

2．感染性废弃物的处理 ①去除污染，任何污染材料未经消毒不能拿出实验室；②液体废弃物须收集在防漏、未破的容器内，用高浓度的化学消毒剂处理；③剩余标本、菌种及接种过的培养基等丢弃前均需消毒；④动物房的废物在处理前及动物笼被清洗前均需消毒，最好经高压蒸汽灭菌；⑤对于有污染的锐器如玻片、注射器、针头等在处理前不要用手接触。