番茄红素含量的测定

1. 蔬菜及制品中番茄红素含量的测定(NY/T1651—2008)

1)原理

蔬菜及制品中的番茄红素经丙酮-石油醚混合溶液(1+1)提取后，用石油醚液萃取，再用二氯甲烷定容，最后用配有紫外检测器的高效液相色谱仪在波长472nm处测定，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量。

2)仪器

①高效液相色谱仪，配紫外检测器;

②分析天平，感量0.01g和0.01mg;

③砂心漏斗，G4;

④分液漏斗，250m L;

⑤旋转蒸发仪;

⑥氮吹仪;

⑦组织捣碎机。

3)试剂

①2，6-二叔丁基对甲酚，分析纯;

②丙酮-石油醚混合溶液(1+1)，分析纯;

③甲醇-乙腈-二氯甲烷溶液(20+75+5)，均为色谱纯;

④无水硫酸钠，分析纯;

⑤番茄红素标准品，纯度≥95%;

⑥番茄红素标准储备液: 准确称取0.0010g番茄红素标准品，用二氯甲烷溶解，转移至10m L容量瓶中，定容至刻度，得到质量浓度为100mg/L的番茄红素标准储备液。分装于三个样品瓶中，应避免光照和高温，储存于-20℃～-16℃备用。

⑦番茄红素标准工作溶液: 使用时番茄红素标准储备液用二氯甲烷稀释得到质量浓度为20mg/L和5mg/L的番茄红素标准工作溶液。

4)操作步骤

(1)样品制备

蔬菜样品洗净后去蒂、去皮，若有籽去籽，按照四分法取样后放入组织捣碎机中捣碎成匀浆。将匀浆放入聚乙烯瓶中于-20℃～-16℃条件下保存。

(2)提取

将样品充分混匀，蔬菜或汁类制品称取样品5.00g，酱类制品称取样品2.00g，置于150 m L烧杯中，加入适量丙酮-石油醚混合溶液直至完全淹没样品，用玻璃棒搅拌后静置，使番茄红素充分溶解，然后移入砂心漏斗中真空抽滤，滤液收集于试管中。重复上述步骤直至将样品洗至无色。

(3)净化

①蔬菜或汁类制品: 将全部滤液转移至分液漏斗中，静置分层，上层有机相通过装有无水硫酸钠的玻璃漏斗后收集至圆底烧瓶中，下层水相继续用20m L石油醚萃取，继续收集有机相，无水硫酸钠用石油醚洗至无色并收集滤液。全部有机相在水浴温度35℃的旋转蒸发仪上浓缩至近干，再经氮气吹干。若有残留水分可加入少量无水硫酸钠吸附。用10.00m L二氯甲烷溶解，如颜色较深，再用二氯甲烷稀释5倍，过0.45μm微孔滤膜，待测。

②酱类制品: 将全部滤液转移至圆底烧瓶中在水浴温度35℃的旋转蒸发仪上浓缩至近干，再经氮气吹干。若有残留水分可加入少量无水硫酸钠吸附。用10.00m L二氯甲烷溶解，如颜色较深，再用二氯甲烷稀释5倍，过0.45μm微孔滤膜，待测。

(4)色谱参考条件

检测波长: 472nm;

色谱柱: C18不锈钢柱，柱长250mm，内径4.6mm，粒径5μm;

流动相: 甲醇+乙腈+二氯甲烷混合溶液(20+75+5);

流速: 1.0m L/min;

进样体积: 10μL。

(5)测定

分别将标准溶液和待测液注入高效液相色谱仪中，以保留时间定型，以待测峰面积与标准溶液峰面积比较定量。除不加试样外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。

图13－3 番茄红素标准溶液色谱图

5)结果计算

样品中番茄红素含量:

式中: X——番茄红素的含量，mg/kg;

ρS——标准溶液质量浓度，mg/L;

VS——标准溶液进样体积，μL;

V0——样品溶液最终定容体积，m L;

VX——待测液进样体积，μL;

AS——标准溶液的峰面积;

AX——待测液的峰面积;

m——样品质量，g。

6)说明及注意事项

本法适用于番茄、胡萝卜、番茄汁、番茄酱等蔬菜及制品中番茄红素的测定，线性范围为10～1000ng，本法的检出限为0.13mg/kg。