总糖的测定

一、实验目的

掌握直接滴定法测定总糖的原理和方法。

二、实验原理

样品经处理除去蛋白质等杂质后，加入盐酸，在加热条件下使可溶性糖水解为还原性单糖，用直接滴定法测定水解后样品中的还原糖总量。

三、实验仪器与试剂

(1)仪器:滴定管(15mL)、移液管(5mL)、烧杯、三角瓶(150mL)、容量瓶(100mL、250mL和500mL)、漏斗、研钵、酒精灯、铁架台、滴定管夹、水浴锅、分析天平。

(2)6mol/mL盐酸溶液。

(3)0．1%甲基红乙醇溶液:称取0．1g甲基红，用60%乙醇溶解并定容至100mL。

(4)20%氢氧化钠溶液。

(5)0．1%转化糖标准溶液:称取105℃烘干至恒重的纯蔗糖1．9g，用水溶解并移入1000mL容量瓶中，定容，混匀。取50mL于100mL容量瓶中，加6mol/L盐酸5mL，在68～70℃水浴中加热15min，取出于流动水下迅速冷却，加甲基红指示剂2滴，用20% NaOH溶液中和至中性，加水至刻度，混匀。此溶液每毫升含转化糖1mg。

(6)费林试剂甲液:称取15g(CuSO4·5H2O)及0．05g次甲基蓝，溶于水并稀释到1000mL。

(7)费林试剂乙液:称取50g酒石酸钾钠及75g氢氧化钠，溶于水，再加入4g亚铁氰化钾，完全溶解后，定容至1000mL，贮存于橡皮塞玻璃瓶中。

(8)乙酸锌溶液:称取21．9g乙酸锌［Zn(CH3COO)2·2H2O］，加3mL冰醋酸，加水溶解并定容至100mL。

(9)10．6%亚铁氰化钾溶液:称取10．6g亚铁氰化钾［K4Fe(CN)6·3H2O］，溶于水，定容至100mL。

四、操作步骤

1．样品处理

取适量样品，移入250mL容量瓶中，慢慢加入5mL乙酸锌溶液和5mL亚铁氰化钾溶液，加水至刻度，摇匀后静置30min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，收集滤液备用。

吸取处理后的样液50mL于100mL容量瓶中，加入5mL6mol/L盐酸溶液，置68～70℃水浴中加热15min，取出后迅速冷却，加甲基红指示剂2滴，用20%NaOH溶液中和至中性，加水至刻度，混匀。

2．费林试剂的标定

准确吸取费林试剂甲液和乙液各5mL，置于250mL锥形瓶中，加水10mL，玻璃珠3粒。从滴定管滴加约9mL转化糖标准溶液，加热使其在2min内沸腾，准确沸腾30s，趁热以每2s1滴的速度继续滴加转化糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好褪去为终点。记录消耗转化糖标准溶液的总体积。平行操作3次，取其平均值，按下式计算。

式中:F——10mL碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量，mg;

c——葡萄糖标准溶液的浓度，mg/mL;

V——标定时消耗葡萄糖标准溶液的总体积，mL。

3．样品溶液预测

准确吸取费林试剂甲液和乙液各5mL，置于250mL锥形瓶中，加水10mL，玻璃珠3粒，加热使其在2min内沸腾，准确沸腾30s，趁热以先快后慢的速度从滴定管中滴加样品溶液，滴定时要始终保持溶液呈沸腾状态，待溶液蓝色变浅时，以每2s1滴的速度滴定，直至溶液蓝色刚好褪去为终点。记录样品溶液消耗的体积。

4．样品溶液测定

准确吸取费林试剂甲液和乙液各5mL，置于250mL锥形瓶中，加水10mL，加玻璃珠3粒，从滴定管滴加入比预测时样品溶液消耗总体积少1mL的样品溶液，加热使其在2min内沸腾，准确沸腾30s，趁热以每2s1滴的速度继续滴加样液，直至蓝色刚好褪去为终点。记录消耗样品溶液的总体积。同法平行操作3次，取平均值。

五、结果计算

式中:F——10mL碱性酒石酸铜溶液相当于转化糖的质量(mg);

V1——样品处理液总体积(mL);

V2——测定时消耗样品水解液体积(mL);

m——样品质量(g)。

六、注意事项

总糖测定的结果一般以转化糖计，但也可以葡萄糖计，要根据产品的质量指标要求而定。如用转化糖表示，应该用标准转化糖溶液标定碱性酒石酸铜溶液，如用葡萄糖表示，则应该用标准葡萄糖溶液标定。