图12 ITS1基因序列构建的NJ分子进化树
将扩增获得的三疣梭子蟹ITS1序列结合GenBank中检索到的5属12种蟹ITS1序列，利用MEGA4.0软件计算种间的遗传距离，勘察加拟石蟹与日本雪蟹间的遗传距离最大为1.6.2 67，拜氏雪蟹与日本雪蟹的遗传距离最小为0.0.4 80，三疣梭子蟹与金霸土蟹的遗传距离最大为1.4.0 39，红星梭子蟹的遗传距离最小为0.6.4 63。对其构建NJ系统发生树，用Bootstrap法检验，1 000次重复抽样得到结点的置信度如图12所示，从系统树可以看出，同属的不同种聚在一起，物种间的界限非常明晰，符合形态学的分类关系。
在研究生物间的系统进化关系时，最重要的途径是构建分子系统进化树。分子系统树就是在生物大分子进化速率相对恒定的理论基础上利用生物大分子间的序列差异或结构的比较而构建出来的，可以很直观地揭示出不同生物的各类群间及种群间的系统进化关系（毕相东等，2005）。利用核基因组序列ITS1差异性构建的分子系统树已经解决了很多物种间系统发生关系的问题，许志强等（2009）构建了蚌科6种类的系统发生关系，为蚌科系统分类研究提供更多的信息。本书结合GenBank数据库中十足目的5属构建 NJ分子进化树（图12），聚类结果显示，同属的不同种各自聚支，与形态学分类吻合。Eriocheir与Chionoecetes以89%的置信度聚为一支，然后与Portunus聚为一支，Paralithodes与Lithodes以100%的置信度聚为一支，说明Eriocheir 与Chionoecetes、Paralithodes与Lithodes亲缘关系较近。
综上所述，本研究的4个野生群体的遗传多样性还较丰富，但近年来我国沿海开展了大规模的三疣梭子蟹人工养殖、半人工采苗、人工育苗等养殖活动，增加了个体间的基因交流，从三疣梭子蟹资源的可持续开发利用角度出发，制定科学的保护措施，建立有效的监控体系，加强野生群体遗传多样性监测，在人工养殖和育种过程中，应该采取增大繁殖群体、定期筛选等措施来防止因近交衰退和遗传漂变等导致的遗传多样性水平降低，以保护我国具有较高经济价值的三疣梭子蟹优良种质资源。
（作者：李远宁，马朋，刘萍，李琪）
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