【摘要】：组织分离法是利用子实体组织来分离获得纯菌丝的方法。组织分离法是一种无性繁殖法，双亲的染色体没有经过重组，因此组织分离基本上可保持亲本的生物学特性，且操作简便，取材广泛，比较常用。
实训项目三 组织分离法制备母种
一、目的要求
了解食用菌组织分离法制母种的原理，学习组织分离法操作程序，掌握其关键技术。
二、实训器材
新鲜菇体、刀片、镊子、培养基斜面试管、酒精灯、75%酒精及酒精棉球、接种箱或超净工作台、培养箱等。
三、实训内容
组织分离法是利用子实体组织来分离获得纯菌丝的方法。组织分离法是一种无性繁殖法，双亲的染色体没有经过重组，因此组织分离基本上可保持亲本的生物学特性，且操作简便，取材广泛，比较常用。
（1）挑选种菇：挑选生长健壮、菌龄适中、无病虫害、具有本品种优良性状的菇体或组织作为种菇。
（2）操作环境、用具消毒：将刀片、镊子、接种箱或超净工作台等严格消毒灭菌。
（3）菇体消毒：将子实体菌柄基部切除，置于接种箱内，用75%酒精对菇体表面进行消毒。
（4）组织分离：将解剖刀经火焰灭菌，在菇柄中部纵切一刀，用手掰开菌再用接种铲在菇盖与菇柄交界处切取黄豆大的小方块，随后挑取一小块组织，快速移接到PDA斜面培养基上并塞好试管塞。
（5）贴标签培养：将试管从接种箱取出之前，应在各支试管正面的上方贴上标签，写明菌种编号、接种日期，随后把试管放入培养箱（室）中，在适宜温度（平菇22℃，香菇25℃）下培养，待组织块萌发菌丝，7～10天菌丝长满斜面且无杂菌污染即为母种。
四、思考题
组织分离法制母种过程中的注意事项有哪些？
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