包装和消毒

项目三　实验器材的清洗、包装和消毒

一、项目背景

在组织细胞培养过程中，体外细胞对任何有害物质都非常敏感。微生物产品附带的杂物、上次细胞残留物以及非营养成分的化学物质，均能影响细胞的生长。因此，对新使用的玻璃器皿和重新使用的培养器皿都要严格彻底地清洗，且在清洗过程中要根据被清洗器皿组成材料的不同，选择不同的清洗方法。此外，消毒灭菌是防止细胞培养污染的最基础、最关键的一个环节。因此，清洗与消毒灭菌是细胞培养的第一步，也是细胞培养中工作量最大、最基本的步骤。

二、项目目标

（1）会清洗和包扎各种玻璃器皿、橡胶制品、塑料制品等；

（2）能无菌化处理培养瓶、培养皿、滤器、瓶塞等物品；

（3）熟练、规范地包扎各种器材；

（4）合理运用各类消毒灭菌手段；

（5）学会已灭菌处理物品的存放与安全使用；

（6）能与小组其他成员有效合作完成工作任务；

（7）善于表达自己的思想；

（8）本着对自己与他人负责的态度，严格做好清洗、包扎、灭菌等工作；

（9）安全意识强，对紫外线、各类消毒灭菌药品与溶液、清洁液等能安全使用；

（10）能将无菌意识贯穿于各工作过程。

三、工作流程

流程一：工作准备

续表

流程二：清洗

1.玻璃器皿的清洗流程

（1）新购置玻璃器皿的清洗步骤。

清水浸泡半小时以上→简单刷洗→5%HCl溶液浸泡过夜→自来水冲洗→在洗涤剂中反复刷洗→自来水中充分冲洗→晾干（或50℃烤干）→浸入清洁液中（俗称浸酸）过夜→流水振荡冲洗20遍→沥水→去离子水冲洗3～4次或浸泡2次（每次24h）→三蒸水冲洗两次（或浸泡一次）→50℃烤干，待包装。

（2）用过的玻璃器皿的清洗步骤。

带毒玻璃器材用后应立即浸入消毒水中，非带毒的玻璃器材需浸入清水中浸泡→刷洗→自来水冲洗→晾干（或50℃烤干）→浸入清洁液中（俗称浸酸）过夜→流水振荡冲洗20遍→沥水→去离子水冲洗3～4次或浸泡2次（每次24h）→三蒸水冲洗两次（或浸泡一次）→50℃烤干，待包装。

2.橡皮帽和胶塞的清洗流程

新购置的橡胶制品（大、小胶塞，胶头）的洗涤方法如下：

2%NaOH溶液煮沸15min→流水冲洗→2%～5%HCl溶液煮沸15min→流水冲洗→去离子水煮沸20min（或去离子水浸泡过夜）→去离子水冲洗一次→三蒸水煮沸20min→三蒸水冲洗一次→50℃烤干，备用。

3.塑料器皿的清洗方法→

用后立即用流水冲洗→浸于自来水中过夜→用纱布或棉签刷洗→流水冲洗→晾干→浸于清洁液中15min→流水冲洗20遍→去离子水浸洗三次→双蒸水中浸泡24h→晾干，备用。

注射器、薄膜滤器刷洗前先将上、下两部分分开，按上述方法清洗、晾干后，将纤维薄膜滤片夹在中间（光面向下），合上上、下两部分拧紧，备用。

4.不锈钢除菌滤器的清洗

先用洗涤剂刷洗滤器→流水冲洗15min→去离子水冲洗2～3次（或去离子水浸泡24h）→三蒸水冲洗2～3次或浸泡24h→干燥，备用。

5.镊子、剪刀的清洗→

纱布擦去脏污→自来水洗净→酒精棉球擦拭。

6.金属滤网的清洗→

自来水冲洗→蒸馏水冲洗→三蒸水冲洗。

流程三：包装

（1）包装时手指与器材接触面积要小，手指不能触及器材的使用端。

（2）瓶类：需局部包扎，用牛皮纸包扎，随后单个或几个一起用纸包好。

（3）玻璃管管口（移液管手持端、抽滤瓶下口端等）加脱脂棉，吸管、滴管随后置于玻璃吸管筒或铜制、铝制吸管筒内（内放纱布），塞上棉塞或盖上有孔盖子（内、外孔对好），外包两层牛皮纸，若没有吸管筒则每根吸管单独包装。

（4）带盖的瓶子或塑料离心管等物品应拧松盖子，包装消毒后再拧紧。

（5）为防止已消毒品和未消毒品发生混淆，应在包装盒或包装纸的表面标注符号（“-”、“＋”）或写上字。

流程四：器皿的消毒

干热消毒主要用于玻璃器皿的消毒，在160℃下消毒120min，消毒后不要立即打开箱门，以防止冷空气骤然进入引起玻璃炸裂，影响消毒效果。

湿热消毒即高压蒸汽消毒，布类、胶塞、金属器械、玻璃器皿以及某些培养用液等都可用此方法消毒灭菌。消毒时间是从压力（表压）达到103.5kPa，温度达到121℃时算起。一般蒸汽消毒30min。橡皮手套和小瓶内的溶液的消毒都不应超过15min。消毒后，调节活塞使压力在7min左右均匀地下降到零。这样能使可能存在的液体得以与周围蒸汽以相同的速度散热，而不至于激烈地沸腾。

各种物品有效消毒压力和时间不同，一般要求如下：

培养用液、橡胶制品　　　　　　　69kPa，10min

布类、玻璃制品、金属器械等　　103.5kPa，20min

流程五：物品的清洗与归位、实验室的整理等

实验结束后，应将实验用器材根据情况进行清洗、整理归位、摆放整齐，打扫实验场地的卫生。

四、工作注意事项

（1）无论采用何种洗涤方法，都不应对玻璃器皿有所损伤，不能用有腐蚀作用的化学药剂，也不能使用比玻璃器皿硬度大的物品来擦拭玻璃器皿；

（2）用过的器皿应立即洗涤，放置太久会增加洗涤难度；

（3）强酸、强碱及其他氧化物和有挥发性的有毒物品，都不能倒在洗涤槽内，以免污染环境水质，必须倒在废液桶内；

（4）难洗涤的器皿不要与易洗涤的器皿放在一起，以免增加洗涤的难度，有油的器皿不要与无油的器皿混在一起，否则使本来无油的器皿沾上油垢，增加洗涤的难度；

（5）棉塞应采用普通新鲜、干燥的棉花制作，不要用脱脂棉，以免因脱脂棉吸水而使棉塞无法使用；

（6）棉塞不要塞得过紧或过松，以塞好后手提棉塞，移液管、三角瓶不下落为宜；

（7）干烤玻璃器皿时，需待烘箱内温度自然下降到60℃以下后，方可开门取出玻璃器皿，避免由于温度突然下降而引起玻璃器皿碎裂。

五、思考题

（1）细胞培养所用器材的清洗要求、清洗要领和注意事项有哪些？

（2）细胞培养常用器材的包装要领和注意事项有哪些？

（3）细胞培养常用器材的消毒灭菌方法有哪些？

（4）如何对细胞培养用培养液进行灭菌？