辅助降血脂功能试验

时间：2022-05-13 理论教育版权反馈

【摘要】：1．血脂主要是指血清中的总胆固醇和甘油三酯。如乙醇含量超过15%，允许将其含量降至15%。受试者最好为非住院的高血脂症患者，自愿参加试验。每组受试者不少于50例。试食组服用受试样品，对照组可服用安慰剂或采用阴性对照。辅助降血脂功能结果判定：在血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇三项指标检测中血清总胆固醇和甘油三酯二项指标阳性，可判定该受试样品辅助降血脂功能动物实验结果阳性。

实验三十四　辅助降血脂功能试验

一、实验目的与要求

1．熟悉动物实验的操作技术与要求；

2．掌握辅助降血脂功能检验与评价的方法。

二、实验原理

1．血脂主要是指血清中的总胆固醇和甘油三酯。胆固醇和甘油三酯都是人体必需的营养物质，但体内的营养讲求平衡，无论是胆固醇含量增高，还是甘油三酯的含量增高，或是两者皆增高，统称为高脂血症，易诱发动脉粥样硬化和冠心病。

2．用高胆固醇和脂类饲料喂养动物可形成脂代谢紊乱动物模型，再给予动物受试样品或同时给予受试样品，可检测受试样品对高脂血症的影响，并可判定受试样品对脂质的吸收、脂蛋白的形成、脂质的降解或排泄产生的影响。

3．同时选择高血脂人群，在不影响药物治疗的情况下，观察受试样品对患者的辅助作用。通过动物实验结果和人体试食试验结果来判断样品是否具有辅助降血脂功能。

三、实验仪器与试剂

1．仪器

（1）解剖器械；

（2）台式水银血压计；

（3）721分光光度计；

（4）自动生化分析仪；

（5）血球计数仪；

（6）心电图机；

（7）B超；

（8）X线机；

（9）尿液分析仪；

（10）大便常规分析仪。

2．试剂

（1）胆固醇；

（2）胆盐；

（3）血清总胆固醇（TC）测定试剂盒；

（4）甘油三酯（TG）测定试剂盒；

（5）高密度脂蛋白胆固醇（HDL－C）测定试剂盒。

四、实验方法与步骤

1．动物实验

（1）样品处理与给予方式

①对于水溶性样品，用蒸馏水配制成溶液或悬浮液灌胃给予动物；对于脂溶性样品，用调和油配制成溶液或悬浮液灌胃给予动物。

②受试样品推荐量较大，超过实验动物的灌胃量、加入饮水或掺入饲料的承受量等情况时，可适当减少受试样品中的非功效成分的含量。

③对于含乙醇的受试样品，原则上应使用其定型的产品进行功能实验，其三个剂量组的乙醇含量与定型产品相同。如受试样品的推荐量较大，超过动物最大灌胃量时，允许将其进行浓缩，但最终的浓缩液体应恢复原乙醇含量。如乙醇含量超过15%，允许将其含量降至15%。调整受试样品乙醇含量应使用原产品的酒基。

④液体受试样品需要浓缩时，应尽可能选择不破坏其功效成分的方法。一般可选择60～70℃减压进行浓缩。浓缩的倍数依具体实验要求而定。

⑤对于以冲泡形式饮用的受试样品（如袋泡剂），可使用该受试样品的水提取物进行功能实验，提取的方式应与产品推荐饮用的方式相同。如产品无特殊推荐饮用方式，则采用下述提取的条件：常压，温度80～90℃，时间30～60min，水量为受试样品体积的10倍以上，提取2次，将其合并浓缩至所需浓度。

⑥必须经口给予受试样品，首选灌胃。如无法灌胃则加入饮水或掺入饲料中，计算受试样品的给予量。

⑦以载体和功效成分（或原料）组成的受试样品，当载体本身可能具有相同功能时，应将该载体作为对照。

（2）动物选择及饲料配制

①健康成年雄性大鼠（150～200g），推荐用Wistar或SD种大鼠，每组8～12只。

②高脂饲料配方：78．8%基础饲料、1%胆固醇、10%蛋黄粉和10%猪油、0．2%胆盐。

（3）剂量分组及受试样品给予时间：实验设三个剂量组和一个高脂对照组，以人体推荐量的5倍为其中一个剂量组，另设2个剂量组，必要时设阳性对照组。预防性给受试样品时间30天，必要时可延长至45天；治疗性给受试样品时间30天，必要时可延长至120天。所有试验动物均自由摄食、摄水。给予受试物的灌胃体积为10ml／（kg·BW）。

（4）脂代谢紊乱模型法———预防性给受试样品：在实验环境下大鼠喂饲基础饲料观察5～10天，然后取尾血，测定血清总胆固醇（TC），甘油三酯（TG），高密度脂蛋白胆固醇（HDL－C）水平。根据血清总胆固醇（TC）水平，进行随机分组，在给予高脂饲料的同时给予不同剂量的受试样品，定期称量体重，于实验结束禁食16h，测血清TC、TG、HDL－C水平。

（5）脂代谢紊乱模型法———治疗性给受试样品：在实验环境下大鼠喂饲基础饲料观察5～10天，然后取尾血，测定血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL－C）水平。自正式实验开始各组动物换用高脂饲料喂饲7～10天，取尾血，再测定血清TC、TG、HDL－C水平，与喂饲高脂饲料前比较以确定是否已形成高脂血症模型。再根据TC水平，进行随机分组，受试样品经口灌胃，高脂对照组给同体积的溶剂，继续给予高脂饲料，并定期称量体重，于实验结束禁食16h，测定血清TC、TG、HDL－C水平。

（6）观察指标：血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇。

2．人体试食试验

（1）受试者纳入标准：单纯血脂异常的人群，保持平常饮食，半年内采血2次，如两次血清总胆固醇（TC）均为≥5．2mmol／L或血清甘油三酯（TG）≥1．65mmol／L，均可作为备选对象，在参考动物实验结果的基础上，选择相应指标异常者为受试对象。

受试者最好为非住院的高血脂症患者，自愿参加试验。受试期间保持平日的生活和饮食习惯，空腹取血测定各项指标。

（2）排除受试者标准

①年龄在18岁以下或65岁以上者。

②妊娠或哺乳期妇女，对受试样品过敏者。

③合并有心、肝、肾和造血系统等严重疾病，精神病患者。

④短期内服用与受试功能有关的物品，影响到对结果的判断者。

⑤不符合纳入标准，未按规定食用受试样品，无法判定功效或资料不全影响功效或安全性判断者。

（3）受试样品的剂量和使用方法：根据受试样品推荐量和推荐方法确定。

（4）试验设计及分组要求：采用自身和组间两种对照设计。根据随机盲法的要求进行分组。按受试者血脂水平随机分为试食组和对照组，尽可能考虑影响结果的主要因素如年龄、性别、饮食等，进行均衡性检验，以保证组间的可比性。每组受试者不少于50例。试食组服用受试样品，对照组可服用安慰剂或采用阴性对照。受试样品给予时间30天，必要时可延长至45天。

（5）观察指标

①安全性指标

a．一般状况　包括精神、睡眠、饮食、大小便、血压等；

b．血、尿、便常规检查；

c．肝、肾功能检查；

d．胸透、心电图、腹部B超检查（仅在试验开始前进行）。

②功效性指标

a．血清总胆固醇（TC）水平及降低百分率、甘油三酯（TG）水平及降低百分率、高密度脂蛋白胆固醇（HDL－C）水平及上升幅度。

b．功效判定标准

有效：TC降低＞10%；TG降低＞15%；HDL－C上升＞0．104mmol／L。

无效：未达到有效标准者。

观察血清总胆固醇（TC）有效率、甘油三酯（TG）有效率、高密度脂蛋白胆固醇（HDL－C）有效率及总有效率。