1．相差油镜法检测梅毒螺旋体
⑴ 取材：在一载物片上加1小滴生理盐水（微量），用另一载物片的一个侧面刮取硬下疳或扁平湿疣上的分泌物与生理盐水混匀，加盖玻片待检。
⑵ 调整显微镜相差油镜和相应的相差聚光器，调整光源强度寻找梅毒螺旋体。
⑶ 在相差油镜下，梅毒螺旋体呈钢丝样、6～12个螺旋，随着镜下液体的流动呈滚动式移动，见图3-87 470～472。
图3-87 470～472 相差油镜下的梅毒螺旋体
2．镀银染色法检查梅毒螺旋体
1） 染色液的配制
（1） 罗吉氏固定液：冰醋酸1.0 ml、甲醛溶液2.0ml、蒸馏水100.0ml。
（2） 鞣酸媒染剂：鞣酸5.0g、石炭酸1.0g、蒸馏水100.0ml。
（3） Fontana氏银溶液：硝酸银5.0g、蒸镏水100.0ml。
临用前，取硝酸银溶液3ml，滴入浓氨液1滴，使呈乳白色。
2） 取材和染色
（1） 用载物玻片一侧轻轻刮取硬下疳或扁平湿疣等患处分泌物，涂于另一载物玻片上，吹干，等检。
（2） 用固定液将涂片固定2 ～ 3min，无水酒精洗涤。
（3） 加媒染剂于涂片上，于酒精灯火焰上略加热使产生蒸气，染30秒钟，水洗。
（4） 加经氨液外理过的银溶液于涂片上，并加热产生蒸气，染30秒钟，水洗，吹干，加中性树胶，加24×24mm盖玻片，待检。
（5） 于光镜油镜下寻找棕黑色、呈6 ～ 12个螺旋的梅毒螺旋体，梅毒螺旋体少时可单一出现，多时成大堆，有时几条螺旋体盘绕在一起，见图3-88 473～475。
图3-88 473～475 光镜油镜下的梅毒螺旋体（镀银染色）
3．镀银染色法与相差油镜法对照检测梅毒螺旋体
⑴ 作者所做的镀银染色法在患者未使用过抗菌素和硬下疳不干涸（有分泌物）的梅毒患者几乎均能检出梅毒螺旋体，因此用该方法检出的阳性病例作为阳性对照，求得相差油镜法（取材方法见相差油镜法检测梅毒螺旋体）的阳性检出率（敏感性）。
⑵ 以非梅毒患者的生殖器溃疡作为阴性标本，同时取溃疡分泌物做镀银染色法和相差油镜法检测梅毒螺旋体作为相差油镜法的特异性。
⑶ 梅毒患者的纳入标准是以TPPA阳性和/或镀银染色法检出梅毒螺旋体，而TPPA阳性和/或RPR阳性，但没有阳性体征者（无硬下疳或无溃疡）不列入观察范围。
⑷ 非TP皮损分泌物（生殖器溃疡）为TPPA阴性和镀银染色法未检出梅毒螺旋体。
⑸ 从表3-3所见，镀银染色法检测梅毒螺旋体的敏感性93.1%,相差油镜法检测梅毒螺旋体的敏感性83.3%，特异性100%。
表3-3 镀银染色法和相差油镜法检测梅毒螺旋体对照表
4．临床意义
⑴ 当人体感染梅毒螺旋体后4～10周，血清中可产生一定数量的抗类脂质抗原的非特异性反应素抗体和抗梅毒螺旋体抗原的特异性抗体。一般情况下，二期梅毒患者血清TPPA和RPR都会出现阳性，通常不会误诊。一期梅毒患者血清TPPA和RPR可能出现双阳性；也可能出现TPPA阳性，而RPR阴性，因为一般情况下TPPA早于RPR；在早期梅毒（梅毒螺旋体感染10天左右）会出现TPPA和RPR双阴性，此时患者生殖器可能会出现硬下疳或溃疡等体征，如不能及时检出梅毒螺旋体会延误诊断。作者曾多次用镀银染色法在患者血清TPPA和RPR双阴性的有硬下疳或生殖器溃疡的分泌物中检出梅毒螺旋体，此时用显微镜直接检出梅毒螺旋体对确诊梅毒更有诊断意义。
⑵ 蒲荣等在TPPA和TRUST均阴性的25例一期梅毒患者中，用消毒棉签取被检者局部分泌物渗出液或局部淋巴结抽出液做荧光定量PCR（FQ-PCR）检测DNA，结果22例阳性，阳性率为88%。
⑶ 目前所见文献中直接检测梅毒螺旋体的首选方法均为暗视野法，但作者却未在天津地区见到其他医院性病实验室或研究机构能够用显微镜直接检测梅毒螺旋体，说明该方法检测梅毒螺旋体并未得到广泛接受和应用，或者在推广该方法上存在一定的难度和问题。先前取材的概念是“先擦掉硬下疳或扁平湿疣上的分泌物，再用钝刀刮取或挤压硬下疳或扁平湿疣上的渗出物作梅毒螺旋体检查”，作者在实践中发现硬下疳和扁平湿疣上的分泌物中含有大量的梅毒螺旋体，正是由于改变了先前的概念，采集硬下疳上的分泌物标本才使镀银染色法的梅毒螺旋体检出率大大提高。几乎在所有未使用过抗生素、且硬下疳不干涸（有分泌物）的梅毒患者均能检出梅毒螺旋体。
⑷ 相差油镜法寻找梅毒螺旋体就像寻找游泳池中潜泳的人一样，有一定难度。而镀银染色法寻找梅毒螺旋体如同看陆地上的人一样，会一目了然。因此，镀银染色法比相差油镜法容易找到梅毒螺旋体，镜下螺旋体的密度也明显高于相差油镜法。
5. 梅毒螺旋体与口腔螺旋体相鉴别
用滴管吸取唾液少许加于载物玻片上，加24×24mm盖玻片，调整显微镜相差油镜和相应的相差聚光器，调整光源强度寻找口腔螺旋体。在相差油镜下，口腔螺旋体呈3～6个螺旋，较梅毒螺旋体粗，见图3-89 476～478。
图3-89 476～478 相差油镜下的口腔螺旋体
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