大鼠心脏缺血-再灌注损伤

第一节　大鼠心脏缺血-再灌注损伤

实验目的

（1）复制心脏缺血-再灌注损伤动物模型。

（2）观察再灌注过程中心功能的变化及再灌注性心律失常的表现。

实验对象及相关用品

1.实验对象

雄性健康SD大鼠（250～350g）。

2.实验相关用品

12%水合氯醛溶液、稀肝素（125U/mL），多功能生物信息采集仪（或多道生理记录仪），小动物人工呼吸机，心电图机，小动物常规手术器械，小拉钩，电烧灼器及其配件，气管插管，左心室导管（直径0.5～0.8mm的聚乙烯管），充气硅胶管（直径3mm、长2cm），小圆针，6-0号线。

实验分组

（1）假手术组。

（2）单纯缺血组。

（3）心脏缺血-再灌注组。

观测指标

（1）心电图。

（2）心功能指标：左室内压（LVP）、左室内压变化最大速率（±dp/dt_max）及左室舒张末期压（LVEDP）。

实验步骤

（1）动物称重后腹腔内注射12%水合氯醛（0.3～0.4mL/100g）麻醉，仰卧固定于小动物手术台上。

（2）剪去颈前及胸部手术部位被毛，作一长约2.5cm的颈前正中切口，分离气管并插入气管插管，接小动物人工呼吸机。

（3）分离右侧颈总动脉，结扎远心端，近心端用小动脉夹夹闭，在靠近结扎处剪口（朝向近心端成45°夹角剪开颈总动脉的1/3～1/2），插入左心室导管（预先充满稀肝素），用线轻扎固定后松开动脉夹，将导管缓慢插入左心室，双重结扎固定，并将导管另一端连接多功能生物信息采集仪（或多道生理记录仪）用于测定多项心功能指标，连接标准肢体Ⅱ导联记录心电图。

（4）在胸骨左侧旁约0.5cm处、第4肋间纵行切开皮肤与肌层，自切口处开胸后立即行呼气末正压呼吸，调整呼吸频率、吸呼比及潮气量（根据呼吸机使用指南及大鼠表现调节，参考值为呼吸频率60～70次/分，吸呼比1∶2，潮气量为0.4～0.5mL）。

（5）剪开心包暴露心脏，以左冠状静脉主干为标志（左冠状动脉主干和前降支始段大多与伴行静脉相伴行（静脉居左）或互相交叉），在左心耳根部下方2～3mm处进针，用6-0线从左冠状动脉的左侧进针，在穿过左冠状动脉下方的心肌表层后在肺动脉圆锥旁出针（图9-1），结扎后左室壁变苍白，并出现室壁运动减弱。将心脏放回原位，待心电图恢复稳定10min后描记正常心电图及LVP、LVEDP、±dp/dt_max等心功能指标。

注意：假手术组，仅在冠状动脉左前降支（LAD）下穿线；单纯缺血组除不松解结扎线外，其余均与缺血-再灌组相同。

图9-1　大鼠心脏血管及结扎部位示意图

（6）结扎冠状动脉左前降支：静脉注入肝素100～200U，结扎时将充气硅胶管置于结扎线与血管之间，利用充气硅胶管的弹性压迫使冠状动脉闭塞5～10min。在冠状动脉闭塞期间，每隔2min记录一次心电图和心功能指标。

（7）剪开结扎线解除闭塞，移去硅胶管，恢复血液灌流，继续观察30～60min。记录解除结扎即刻及随后动态的心电图和心功能指标变化。

注意事项

（1）行左心室插管时要小心，防止出血，切勿刺破主动脉壁及心室壁；作冠状动脉穿线宜采用无创伤小圆缝合针，动作要轻，位置要准，且进针宜浅，否则易引起传导阻滞而导致动物死亡。

（2）有关潮气量的调整：①潮气量可以大鼠呼吸时胸廓的起伏程度作为参照，较麻醉状态下呼吸程度稍大即可；②观察大鼠心脏表面，左心室应该是鲜红色，如果暗红则应该加大潮气量；③如果潮气量过大，可以看到肺脏被气体撑得非常饱满，失去了原来的粉红色。

（3）严格掌握缺血时间，过长或过短均不易诱发再灌流性心律失常。

思考题

大鼠单纯心肌缺血与心肌缺血后再灌注有什么不同表现？为什么？