离体蛙心灌流实验

时间：2022-05-06 理论教育版权反馈

【摘要】：蟾蜍心脏离体后，如用理化特性近似于细胞外液的任氏液灌流保持其新陈代谢的正常进行，则心脏仍能有节律的自动收缩和舒张，并可维持较长时间。此时离体蛙心已制备成功，可供实验。

实验五　离体蛙心灌流实验

一、实验目的

1.学习离体蛙心的灌流方法。

2.了解K⁺、Na⁺、Ca²⁺、肾上腺素、乙酰胆碱等各种体液因素对心脏活动的影响。

二、实验原理

蛙心的起搏点——静脉窦能按一定节律自动产生兴奋，因此，只要将离体的蛙心保持在适宜的环境中，在一定时间内就能产生节律性兴奋和收缩活动；另一方面，维持心脏正常的活动，需要有一个适宜的理化环境，一旦这个环境被干扰或破坏，心脏活动就会受到影响。蟾蜍心脏离体后，如用理化特性近似于细胞外液的任氏液灌流保持其新陈代谢的正常进行，则心脏仍能有节律的自动收缩和舒张，并可维持较长时间。离体心脏活动所需的灌注液应与动物的内环境基本一致，因此，改变灌注液的成分，如Na⁺、K⁺、Ca²⁺三种离子浓度的改变以及加入各种递质后，则可引起心脏活动的改变。

三、实验对象

蛙类。

四、实验器材

BL－420F生物信号采集处理系统、蛙类手术器械1套、张力换能器、蛙心夹、棉线、滑轮、铁支架、双凹夹、蛙心插管、滴管、污物缸。

五、实验药品

任氏液、0.65%NaCl、2%CaCl₂、1%KCl、1∶10 000肾上腺素溶液、1∶10 000乙酰胆碱溶液。

六、实验步骤和观察项目

1.离体蛙心制备

（1）取蟾蜍1只，破坏脑和脊髓后，仰卧固定在蛙板上，用组织剪从剑突下将胸部皮肤向两侧剪开，再用粗剪刀剪掉胸骨，用眼科剪剪开心包膜，暴露心脏。

（2）分离左、右主动脉干，在两个主动脉干下方穿两根线，一条在主动脉上端结扎作插管时牵引用，另一根则在动脉圆锥上方系一松结，用于结扎和固定蛙心插管。

（3）左手持左主动脉干上方的结扎线，将心脏上翻，辨认静脉窦，腔静脉，然后结扎腔静脉（结扎线应尽量下压，以免伤及静脉窦）。心脏复位后，用眼科剪在左侧主动脉干距分叉部1～2cm处沿向心方向剪一“V”形口，其宽度为血管周径的1/3～1/2。将盛有少量任氏液的蛙心套管（用拇指将套管堵住，以防套管中的任氏液流出）从“V”形口插入动脉圆锥，当插管头部到达动脉圆锥时，再将插管稍稍后退，将蛙心插管尖端转向蟾蜍的背侧及左下方，在心室收缩期插入心室（不可插入过深，以免心室壁堵住插管下口）。如进入，可有落空感。判断蛙心插管是否进入心室，可根据插管内任氏液的液面是否能随心室的舒缩而上下波动来定。观察到管中液面随着心室舒缩而上下波动，此时即用一根棉线将蛙心插管和左、右主动脉一并结扎牢固，线的残端固定在蛙心插管的侧钩上，以免蛙心插管滑出心室。

（4）轻轻提起插管以抬高心脏，然后剪断主动脉左右分支及结扎线下的腔静脉，将蛙心游离出来。用吸管吸净插管内余血，用新鲜任氏液，反复冲洗数次，直到液体完全澄清。此时离体蛙心已制备成功，可供实验。

2.仪器连接和参数设置

（1）将蛙心插管固定在铁支架上，用蛙心夹在心室舒张期夹住心尖，并将蛙心夹的线头连至张力换能器的悬梁臂上。此线应有一定的紧张度。

（2）按图4－5－1连接，张力换能器输出线接生物信号采集处理系统第二通道（亦可选择其他通道）。

3.观察项目

（1）打开实验系统进行记录。描记正常的蛙心搏动曲线，注意观察心跳频率、强度及心室的收缩和舒张程度。曲线幅度代表心脏收缩的强弱；曲线密度代表心跳频率；曲线的规律性代表心跳的节律性；曲线的基线代表心室舒张的程度；曲线的顶点水平代表心室收缩的程度。

（2）把蛙心插管内的任氏液全部更换为0.65%NaCl溶液，观察心搏变化。

（3）吸出0.65%NaCl，用新鲜任氏液反复换洗数次，待曲线恢复稳定状态后，再在任氏液内滴加2%CaCl₂1～2滴，观察心搏变化。

（4）将含有CaCl₂的任氏液吸出，用新鲜的任氏液反复换洗，待曲线恢复正常后，在任氏液中加1%KCl 1～2滴，观察心搏变化。

（5）将含有KCl的任氏液吸出，用新鲜的任氏液反复换洗，待曲线恢复正常后，再在任氏液中加1∶10 000的肾上腺素溶液1～2滴，观察心搏变化。

（6）将含有肾上腺素的任氏液吸出，用新鲜的任氏液反复换洗，待曲线恢复正常后，再在任氏液中加1∶10 000的乙酰胆碱溶液1～2滴，观察心搏变化。

七、注意事项