活性代谢产物浓度的测定

有些药物可以在体内形成比原型药物活性更高的活性代谢产物，因此这些药物的TDM除原型药外，还需检测具有药理活性的代谢物，此外，也有些药物本身没有药理活性(前体药物)，需在体内经过代谢激活才能发挥作用。对于前体药物以及产生较高浓度活性代谢产物的药物，在临床药物浓度监测时应当对活性代谢产物进行监测。

研究活性代谢产物的临床意义:①有利于深入指导临床的合理用药;②有利于解释血药浓度与药效间的矛盾，如浓度与效应间的不平行现象;③有助于解释和预防某些不良反应，即某些药物代谢物的治疗活性不一定很高，但是当肾功能障碍时，代谢物积蓄到一定程度时，就会出现不良反应。监测代谢物时应当考虑以下因素:①代谢物药理活性与原型药物的关系，它们的作用是相加、协同还是拮抗;作用强度比为多少。②代谢物与原型药物的代谢动力学有无异同。③肝肾功能障碍时，代谢物有无累积，程度如何。

在选择测定活性代谢物的方法时，要充分考虑原型药和活性代谢产物同时存在可能对测定产生的影响。如果用免疫法测定代谢产物时，由于原型药和活性代谢产物的母体结构相似，会产生原型药和活性代谢产物交叉抗原抗体反应而导致测定结果偏高。液相色谱－质谱联用技术是测定活性代谢产物的有效方法，其难点在于某些活性代谢产物缺乏相应的对照品，这种情况下，质谱只能用来对代谢产物的结构进行定性分析，而不能对代谢产物定量，这在一定程度上阻碍了活性代谢产物的测定。

目前进行活性代谢产物监测主要的有:胺碘酮及N－脱乙基胺碘酮、奎尼丁及3－羟基奎尼丁、扑米酮及苯巴比妥、普鲁卡因胺及乙酰普鲁卡因按、普萘洛尔及4－羟基普萘洛尔、奥卡西平及10－羟基卡马西平等。

实例:高效液相色谱－质谱联用法同时测定奥卡西平及其活性代谢产物10－羟基卡马西平的浓度

奥卡西平(oxcarbazepine，OXC)，是传统抗癫痫药物卡马西平的10－酮基衍生物，经过肝脏细胞质芳基酮还原酶还原成活性代谢产物10－羟基卡马西平(MHD)，主要作用机制是阻断电压依赖性钠离子通道来达到抗癫痫的作用。奥卡西平作为一种新型抗癫痫药物，不良反应发生率比卡马西平低，且症状比较轻，在临床的使用率越来越高。奥卡西平口服吸收完全，同时被迅速代谢为活性代谢产物MHD，奥卡西平的消除半衰期为1～2 h，而MHD的消除半衰期为9～11 h，因此，临床上通过测定MHD的浓度实现对奥卡西平的血药浓度监测。

1.HPLC条件

选用WATERS公司Symmetry C18(100 mm×2.1 mm，3.5μm)色谱柱;流动相由乙腈:0.02%甲酸溶液=40 60(v/v)组成;流速为350μL·min－1;进样体积为10μL。

2.质谱条件

选用电喷雾(ESI)离子源，在正离子电离模式下，采用多反应监测(MRM)的质谱扫描方式，测定OXC、MHD和内标(苯环庚酰胺，CYE)的检测离子分别为:m/z 253→180，255→194，238→178。质谱参数:OXC和MHD的检测参数为锥孔电压25 V，碰撞电压25eV，碰撞气(氩气)压力3.1×10－3 mbar;CYE的检测参数为锥孔电压25 V，碰撞电压30 eV，碰撞气(氩气)压力3.1×10－3mbar。

3.样品处理方法

精密吸取150μL血清中加入10μL内标溶液，涡旋混匀。SPE固相萃取小柱用3 mL甲醇活化，3 mL水洗脱两次，真空泵抽干后上样，用3 mL水淋洗两次，真空泵抽干，然后用3 mL甲醇洗脱，洗脱液在40℃氮气流吹干用150μL流动相复溶后10μL进样。本方法具有良好的特异性、精密度和准确度，内源性物质及常见合并用药均不干扰测定，应用于奥卡西平及其活性代谢产物的测定取得了满意的结果。