甲状腺结合球蛋白测定

一、概 述

甲状腺结合球蛋白(thyroid binding globulin,TBG)是人血浆中甲状腺激素的主要转运蛋白,由肝合成,为含糖20%的一种酸性糖蛋白,电泳上移动在球蛋白α1和α2之间,分子量64000,血中半衰期约5d,它包括395个氨基酸,4个门冬酰胺连接的寡聚糖链,结合人血浆中T 4的65%和T3的75%。TBG可以作为甲状腺外T4和T3的储存库和避免它们的肾清除, T 4与T 3分泌入血循环后,绝大部分与血浆内蛋白质相结合,主要与TBG结合。

二、病人准备

1.检测不受饮食、运动影响。

2.雄激素的使用可使其浓度降低,在采血前停用。

3.雌激素治疗、口服避孕药以及海洛因和其他镇痛药可引起TBG升高,在采血前避免服用。

三、标本采集

1.采集时间 一般早晨或上午空腹采集静脉血,于普通试管或用EDTA/肝素作为抗凝剂的抗凝管中,4h内送检。

2.标本保存

(1)全血标本请于室温放置至自然凝固后离心20min,分离血清检测。

(2)抗凝标本采集后30min内离心15min,分离血浆检测。

(3)如不能立即检测,将以上标本置室温24h,4℃保存应<1周,-20℃或-80℃均应密封保存,-20℃不应超过1个月,-80℃不应超过2个月,避免反复冻融。

(4)标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。

3.注意事项 一般不建议使用真空采血管,原因是真空采血管中普遍应用一种化合物(Silwet L-720),该化合物可使TBG浓度显著升高。

四、试验方法及正常参考范围

1.放射免疫分析法 用放射性碘(125 I)标记的TBG与标本中的TBG共同结合有限量的特异性抗体,当样品中的TBG浓度较高时,与抗体结合的标记抗原就少,反之亦然。用免疫分离剂分离出抗原-抗体复合物,并测定结合物中的放射性。放射性的强度与样品中TBG的含量成反比。

2.酶联免疫分析法 用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗TBG抗体的微孔中依次加入标本或标准品,生物素化的抗TBG抗体,HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的TBG呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。

3.电化学发光免疫分析法 采用双抗体夹心法原理,待测标本、生物素化的抗甲状腺结合球蛋白单克隆抗体和钌标记的抗甲状腺结合球蛋白单克隆抗体混匀,形成夹心复合物。加入链霉亲和素包被的微粒,让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。微粒通过磁铁吸附到电极上,未结合的物质被清洗液洗去,电极加电压后产生化学发光,通过光电倍增管进行测定光量子。其发光强度与待测抗原成正比。

五、临床意义

1.血清TBG升高常见于 妊娠、口服避孕药、雌激素、奋乃静等药物治疗;甲状腺功能减退、肝硬化、多发性骨髓瘤、急性间歇性卟啉病、新生儿TBG增高、家族性TBG增多症。

2.血清TBG降低常见于 雌性激素、泼尼松、苯妥英钠、大剂量糖皮质激素应用;肢端肥大症、严重的肝衰竭、肾病综合征、失蛋白性肠道疾病;家族性TBG降低症。