【目的】掌握血涂片染色白细胞分类计数方法。
【方法】显微镜计数法。
【标本】新鲜全血(EDTA-K 2抗凝)。
【试剂】Wright染液。
【器材】普通光学显微镜、载玻片、香柏油、擦镜纸、清洁液。
【操作步骤】
1.操作前准备:戴口罩、帽子、手套,穿工作服,准备并清点本试验所需器材。
2.制备血涂片并染色(见操作九)。
3.将染色后的血涂片置于显微镜镜台上,用推片器弹簧夹夹住,用低倍镜观察全片,了解白细胞的分布和染色情况,观察有无特殊细胞。
4.选择涂片体尾交界处细胞分布均匀、着色良好的区域,滴加香柏油1滴,用高倍镜从边缘向中央依次上下呈城垛状迂回移动,对所看到的每一个细胞进行观察、识别和记录。
5.计数100个白细胞,按其形态特征进行分类,求出各类型白细胞所占细胞的百分比。
6.操作后正确处理医疗垃圾,实验器材归回原位。
【注意事项】
1.各类白细胞大小不等,其在血片分布区域不同,体积较小的淋巴细胞以血片的头、体部较多,而体积较大的中性粒细胞和单核细胞以尾部和两侧较多,因此分类最佳区域为体、尾交界处。
2.分类计数时应遵循一定方向有秩序地连续进行,如采用“城垛式”连续进行,不能遗漏也不能重复视野。每计数一个细胞均应记录。
3.一般分类计数100个白细胞。当白细胞总数>15.0×109/L时,应计数200个白细胞,总数<3.0×109/L时,应计数2张血片50～100个白细胞。
4.分类中如有有核红细胞,应逐个计数,不计入100个白细胞数内,以分类100个白细胞过程中见到的有核红细胞数量报告。还应注意观察成熟红细胞、血小板等形态、染色、分布情况及有无寄生虫等其他异常所见。
【技能要点】
1.严格按照操作步骤操作,动作熟练、迅速、规范。
2.推片和染色质量,有头、体、尾,细胞分布均匀。
3.白细胞分类计数区域和分类方法。
4.能够辨认异常细胞。
(武湘云 李立新)
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