一、概述
20世纪50年代,库尔特根据血细胞是不良导体的特性,在电解质溶液中悬浮细胞颗粒在通过计数小孔时引起电阻变化(形成脉冲),再经过仪器放大、甄别、整形、计数,生产出第一台血细胞计数仪,开创了血细胞分析仪的新纪元,使人工计数实现了自动化。此种根据库尔特原理设计的仪器,至今仍是血细胞自动化分析仪的主要类型。
二、基本结构
1.机械系统,包括进样针、分血器、稀释器、混匀器、定量装置等。
2.电学系统,包括主电源、电子元器件、控温装置、真空泵电子系统、仪器自动监控、报警系统等。
3.血细胞检测和血红蛋白测定系统。
4.计算机控制系统。
三、检测原理
以电阻抗原理为例。
1.细胞计数 定量的血液经电解质溶液按比例稀释,悬浮于电解质溶液中的血细胞相对于电解质溶液为非导电体,当血细胞通过仪器的计数小孔时,可引起小孔内外电流和电压的变化,从而产生一个电压的脉冲信号,不同大小的细胞,其脉冲信号大小不同。脉冲信号的大小与细胞体积呈正相关,脉冲的多少与细胞的数量等值。通过计算机处理可得到各类细胞的结果。
2.血红蛋白 常用的有氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法和十二烷基硫酸钠血红蛋白测定法,前者被国际血液学标准化委员会推荐为Hb测定的标准方法。
(1)氰化高铁血红蛋白法:血红蛋白中的亚铁离子被高铁氰化钾氧化成高铁离子,进而血红蛋白转化为高铁血红蛋白,与氰化钾中的氰离子反应生成氰化高铁血红蛋白。540nm条件下测定吸光度,吸光度与浓度成正比,换算可求出血红蛋白浓度。
(2)十二烷基硫酸钠血红蛋白法:血红蛋白与十二烷基硫酸钠结合生成血红蛋白衍生物,特定波长比色,吸光度与浓度成正比,换算可求出血红蛋白浓度。
3.白细胞分类
(1)三分类:专用溶血剂溶解红细胞的同时也可使白细胞膜表面产生小孔,细胞失水皱缩,不同类型的白细胞其体积、细胞核及胞质中的颗粒成分均不同,从而将其分为大、中、小三群(粒细胞群、中间细胞群、淋巴细胞群)。
(2)五分类:不同型号的仪器所采用的技术也不同。主要包括VCS分类法、多角度激光散射法、阻抗和射频法、多角度偏振光散射法、光散射与细胞化学联合分类法。
4.网织红细胞计数与分类 荧光染料与网织红细胞内RNA结合,细胞通过特定波长的检测激光束时发出荧光,测定网织红细胞占成熟红细胞的百分比。根据荧光强度可将其分为低荧光、中荧光和高荧光强度的网织红细胞三类。
四、校准
新安装仪器或仪器调整、维修后,会因基准值的变化而影响血细胞分析仪的精密度和准确度,应进行校准。
(1)全血校准物:使用经国家认证的校准物,并在有效期内使用,无变质或污染。
(2)血细胞分析仪使用配套试剂。
(3)血细胞分析仪的准备:仪器自检完成后满足要求,精密度合格。
(4)校准物的测定:严格遵守操作程序,在血细胞分析仪上连续测定11次,用第2～11次结果计算,求出新校准因子。
(5)对校准结果进行评价(精密度和准确度)。
五、性能评价
根据美国临床实验室标准化委员会推荐的方法对血细胞分析仪的性能进行评价,是评价血细胞分析仪的主体内容,用户验证指标包括:
1.空白检出限 又称为本底。
2.携带污染 指检测的前一个标本对后一个标本结果的影响,必须进行高值对低值标本的携带污染率的评价。
3.精密度(重复性) 包括批内、批间和总精密度评价。
4.检测限 标本被检出的最低浓度。
5.分析测量区间 即分析测量范围。
6.可比性 待测仪器与原系统仪器的结果到达一致的能力。
7.不同检测模式的比较 即全血模式和稀释模式、自动进样和手动进样模式的结果评价。
8.干扰物的评价 对已知干扰物的评价,如黄疸、脂血等。
9.参考区间 建立用户自己的参考区间。
六、维护
建立血细胞自动分析仪标准操作和维护程序并定期检查,专人负责。按照厂家的要求进行日保养、周保养、月保养、年保养等,并做好记录。
七、常见故障及排除
1.堵孔 血细胞不能通过微孔计数,仪器显示屏上显示“CLOG”;按CLEAN键清洗。
2.气泡 按CLEAN键清洗。
3.噪声 主要是由于测试环境噪声干扰或接地线不良所致,仪器分开安装,接好地线。
4.流动比色池 血红蛋白测定重复性差,按CLEAN键清洗血红蛋白比色池。
5.细胞计数重复性差 多为小孔脏或环境噪声大。处理同上述第1条和第3条。
(张长庚 李宝亮 李立新)
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