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方法和机制

时间:2022-04-17 理论教育 版权反馈
【摘要】:在第2天和第18天间葡萄糖含量的明显改变提示细胞摄取大量的葡萄糖,这可能是由于细胞分裂造成的。实际上,当前脂肪细胞开始分化时,细胞就产生了甘油三酸酯的堆积。这些结果指出明胶微粒上的细胞是处于分化的早期阶段。也有报道称,DNA损伤诱导蛋白153在前体脂肪细胞进入分化循环后调节减弱。

这一概念验证研究的目的是区分和评估前体脂肪细胞种植在不同表面、不同质地和不同化学特性的支架结构后,所产生的行为及蛋白基因表达情况。在将明胶微球和聚交酯微球与聚苯乙烯支架相比较时支架的材料和地形学影响细胞附壁及其行为表达,这一现象(结果)在我们的意料之中。例如,种植在凝胶微球上的前体脂肪细胞在整个培养过程持续附壁和增殖,产生更多三酰甘油,与培养在聚交酯微球上的前体脂肪细胞相比,可以收获更多活细胞。

在第2~18天乳酸的显著增加表明细胞的代谢旺盛,但是单凭这些数据本身并不能说明细胞行为的特异性改变及增殖以外的明显分化。聚交酯微球和聚苯乙烯上的细胞,在分化培养液中培养后,在整个观察周期内都未见有明显的乳酸增高。在第2天和第18天间葡萄糖含量的明显改变提示细胞摄取大量的葡萄糖,这可能是由于细胞分裂造成的。实际上,当前脂肪细胞开始分化时,细胞就产生了甘油三酸酯的堆积。通过对甘油三酸酯的检测结果发现,同样在分化培养液中培养18天后,在明胶支架上的细胞要比聚交酯微粒和2D表面附着细胞产生的甘油三酸酯的浓度明显增加。这些结果指出明胶微粒上的细胞是处于分化的早期阶段。

Pico Green试验结果指出不管应用什么样的培养液,细胞数目在整个培养周期中都有增加。细胞数目的增加说明虽然大部分细胞处于分化状态,其他细胞仍处于增殖阶段,这表明了细胞的异质性。Pico Green的结果同样表明,种植在聚交酯微球上的细胞增殖了2.5倍,而种植在明胶微球上的细胞增殖了2.2倍。细胞在明胶微球上更容易生长,也更易于分化,因此,细胞增殖较少。种植在聚交酯微球上的细胞因附着不牢,因此分化较慢,增殖的细胞较多。明胶微球跟聚交酯微球相比较,具有不同的表面结构和化学特性,这样使得细胞更容易生长。比如,明胶微球的多孔结构使其表面积增加,更容易使细胞附着、生长。另外,其粗糙的表面也曾被报道可以增加细胞的附着。聚交酯微球最初表面光滑,但水解后形成粗糙表面,可以促进细胞附着。很明显,这些微球表面的变化还不足以使细胞停止增殖,走向分化。

表面化学技术是两种支架上细胞数目不同的另一个原因。明胶,作为一种变性的胶原蛋白,是一种天然的生物材料,可以自然地使细胞附着于表面。聚交酯是一种合成的生物材料,不能促进细胞在其表面附着。细胞之所以能在聚交酯微球表面附着是因为在微球表面添加了血清。

这些结果表明,种植在明胶微球表面的细胞可以产生脂质并具有成熟脂肪细胞的特点,因此在寻找促进细胞增殖和分化的支架方面是更好的选择。DNA损伤诱导蛋白153是生长抑制基因,它在细胞结束增殖期进入分化期时表达。Tang和Lane报道,DNA损伤诱导蛋白153在脂肪前体细胞中出现生长抑制时表达,其后表达降低。也有报道称,DNA损伤诱导蛋白153在前体脂肪细胞进入分化循环后调节减弱。然而,Shugart及其同事的研究表明,细胞进入另一不同阶段后会继续增殖,只是增殖效率大大减慢。Darlington及其同事得出与Shugart相似的结论:即DNA损伤诱导蛋白153在分化前的克隆扩增阶段降低,但在分化后的第4天升高,并一直处于较高水平。我们的研究结果表明,DNA损伤诱导蛋白153在整个分化阶段都有表达,支持Darlington等的观点。

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