恶性疟原虫检测

疟原虫是疟疾的病原体。人类疟疾有四种，由四种不同的疟原虫引起，包括间日疟，病原为间日疟原虫（plasmodiom vivax）；三日疟，病原为三日疟原虫（p．malari-ae）；卵形疟，病原为卵形疟原虫（p．ovale）；恶性疟，病原为恶性疟原虫（p．falciparum）。在我国主要是间日疟原虫和恶性疟原虫。

疟原虫的生活史过程比较复杂，需两个宿主，在中间宿主（任何脊椎动物）体内进行无性生殖，在终末宿主（按蚊）体内进行有性生殖，形成世代交替。雌按蚊叮咬人体时，唾液腺中如含有子孢子，子孢子则随蚊唾液进入人体，首先在肝细胞内进行裂体增殖，形成大量裂殖子释放入血，称红细胞外期；继而在红细胞内进行裂体增殖和配子体形成的有性生殖开始阶段，称红细胞内期。红细胞内期疟原虫经几次裂体增殖后，一部分裂殖子侵入红细胞内不再进行裂体增殖，而发育为雌配子体（macrogametocyte）或雄配子体（microgametocyte）。成熟的配子体如被合适的雌按蚊吸入后，即在蚊胃中进行生殖，否则在人体经3～6d因趋变性被吞噬细胞消灭。恶性疟原虫在人体内的寿命为1年。当上述按蚊再叮吸人血时，孢子就侵入人体，引发疟疾。

疟疾对人的危害主要由红细胞内期裂体增殖期所致。经过几代裂体增殖后，血中的虫体密度达到发热阈数，引起机体发热。发作的原因主要是裂殖子胀破红细胞，裂殖子、疟原虫的代谢产物、变性的血红蛋白及红细胞碎片被多形核白细胞及单核吞噬细胞吞食，刺激这些细胞产生内源性致热源，与疟原虫代谢产物共同作用于下丘脑的体温调节中枢引起发热。

典型的疟疾发作表现为周期性的寒战、发热和出汗退热三个连续阶段。这种周期性的发作与疟原虫红细胞内期裂体增殖周期一致。临床表现为间歇性、定时性、发作性的寒战、高热和大汗，以及贫血和脾大。发作次数主要取决于治疗适当与否和人体免疫力增长速度。无免疫力的初发病人一般可发作数次或十余次。若无重复感染，随着发作次数的增多，人体对疟原虫的免疫力逐渐增强，疟原虫逐渐被消灭或抑制，发作自行停止。间日疟疾和卵形疟疾隔日发作一次，三日疟疾隔两天发作一次，恶性疟开始隔日发作一次，以后则每天发作或间隔时间不规则。多数疟疾最初发作间隔期并不规则，随着数量多的一批占优势，发作时间出现规律性。当混合感染两种或两种以上疟原虫时，发作时间可无规律性。此外，儿童或初入疟区的患者发作多不典型。

据WHO估计，每年全球疟疾发病人数约1亿人，造成约1百万儿童死亡，是危害人类健康的重要寄生虫病之一。在我国疟疾被称为五大寄生虫病之一，其传染源是周围血液中带有配子体的患者或带虫者，血液中带有红细胞内期疟原虫者经输血也可传播他人。传播媒介为按蚊，我国有8种按蚊可传播疟疾，其中主要有中华按蚊、嗜人按蚊和微小按蚊。人群除少数对某种疟疾具有先天性免疫力及高疟区婴儿从母体获得一定抵抗力外，大多对疟疾易感。

防治：主要的抗疟药有以下几类。①杀灭红外期裂殖子及休眠子：伯氨喹、乙胺嘧啶可防止发作及复发；②杀灭红内期裂体增殖期：氯喹、奎宁、咯萘啶、青蒿素等，可控制发作；③杀灭配子体：伯氨喹可阻断传播；④杀灭孢子增殖期：乙胺嘧啶可阻断蚊虫传播，间日疟一般采用氯喹和伯氨喹治疗，抗复发治疗可用伯氨喹。恶性疟可用氯喹，对氯喹有抗性的地区宜采用几种抗疟药合并治疗。在防治疟疾流行方面，除积极治疗现症病人外，流行区可对病人进行预防用药，一般采用氯喹或乙胺嘧啶加磺胺多辛，加强流动人口疟疾的管理，做好疟疾的监测工作，防蚊灭蚊等。

从患者血液中检出疟原虫是确诊疟疾的依据。询问病史如周期性发作史、是否进入疟区及停留时间长短等均有辅助诊断价值。间接免疫荧光试验（IFAT）检测抗体方法、间接红细胞凝集试验（IHAT）、酶联免疫吸附试验（ELISA）效果也较好。此外，应用DNA探针检测疟原虫核酸或PCR法扩增疟原虫DNA等方法，在提高检出率方面有较高的应用价值。HRP-2（组氨酸富集蛋白）是恶性疟原虫含有的特异性蛋白，检测全血中是否含有HRP-2，从而可检测是否有恶性疟原虫存在，可作为POCT较佳的检测方法。

【检测原理】　采用高度特异性的抗原抗体反应及免疫层析分析技术来定性检测全血中是否含有恶性疟原虫特异性HRP-2，试剂卡含有被事先固定于膜上测试区（T）的抗P．f．抗体和质控区（C）的羊抗鼠抗体。

【适应证】　帮助发热患者诊断恶性疟疾。

【标本采集】　全血标本收集后应尽快使用。标本若不能及时送检，可冷藏在2～8℃3d。长期保存需冷冻于-20℃，忌反复冻融。

【操作方法】　测试剂盒和全血标本恢复至室温，取出反应缓冲液并放置20min使其恢复至室温（20～30℃）。

1．从原包装铝箔袋中取出试剂卡（注意：在打开铝箔袋前应先恢复至室温）。在1h内进行测试会得到最佳效果，特别是在室温高于30℃或是在高度潮湿的环境中应尽快地使用。

2．将试剂卡置于干净平坦的台面上，用一次性毛细吸管垂直滴入10μl全血标本于加样孔S中，然后滴入3滴缓冲液于加样孔S中。

3．等待紫红色条带的出现，在15min左右读取测试结果。关键要注意，在紫红色条带出现以前，背景要清晰，特别当样本中含有低滴度的HRP-2，会导致出现的T线颜色很淡，此时更需注意背景要清晰。在20min后读取的结果无效。

【结果判读】

1．阳性　两条紫红色条带出现，一条位于测试区（T）内，另一条位于质控区（C）。阳性结果表明标本中含有恶性疟原虫特异性HRP-2。

2．阴性　仅质控区（C）出现一条紫红色条带，在测试区（T）内无紫红色条带出现。阴性结果表明标本中没有恶性疟原虫特异性HRP-2。

3．无效　质控区（C）未出现紫红色条带，表明不正确的操作过程或试剂盒已变质损坏。在任何情况下，应重新测试。如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商联系。

【临床意义】　HRP-2（组氨酸富集蛋白）是恶性疟原虫含有的特异性蛋白，检测全血中是否含有HRP-2，从而可检测是否有恶性疟原虫存在。

【局限性】　测试仅表示样本中HRP-2的存在，而不能作为机体感染恶性疟疾的唯一标准。检测结果必须结合内科医生得出的其他临床症状进行诊断。如果测试结果呈阴性并有临床症状存在，可建议使用其他临床方法进行测试。阴性结果并不能完全排除感染恶性疟疾的可能性。