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细胞培养的无菌操作设施

时间:2022-04-11 理论教育 版权反馈
【摘要】:超净工作台占据空间面积小,启动电源后很快即可使用,操作方便。超净工作台也应放在清洁无尘的房间,且须定期更换过滤装置。生物安全ⅡA级、ⅡB级超净工作台可供生物安全Ⅱ级的细胞培养实验使用,生物安全Ⅲ级及以上培养物的培养和实验不但需要Ⅲ级生物安全柜,还需要特殊的生物安全Ⅲ级实验室,进出该实验室的所有物品包括空气都需灭菌处理。

细胞培养的无菌操作设施主要有超净工作台和超净工作室。

(一)超净工作台

这是一般实验室可采用的普及型无菌操作装置。其工作原理是利用鼓风机驱动空气经过高效过滤装置净化后再通过工作台面,在工作台面构成无菌环境。超净工作台占据空间面积小,启动电源后很快即可使用,操作方便。超净工作台也应放在清洁无尘的房间,且须定期更换过滤装置。由于空气中浮尘颗粒较多,为延长超净工作台的使用寿命,可用5~8层纱布覆盖在第一级滤口外侧,阻挡较大的颗粒。国内有许多厂家生产超净工作台,有单人使用和双人使用的不同型号可供选择。超净工作台根据气流和隔离屏障分为生物安全Ⅰ级、生物安全ⅡA级、ⅡB级和生物安全Ⅲ级及以上(图2-1)。根据所培养细胞的生物安全级别(生物安全Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级),选择相应级别的生物安全柜。普通超净台,可作Ⅰ级安全柜使用。两者空气过滤相同,气流方向有所差别。后者有排风系统。现在许多改良的超净台,也增加了回风设计,可满足细胞培养的无菌操作需要,可供大部分常规培养细胞(Ⅰ级)使用。生物安全ⅡA级、ⅡB级超净工作台可供生物安全Ⅱ级的细胞培养实验使用,生物安全Ⅲ级及以上培养物的培养和实验不但需要Ⅲ级生物安全柜,还需要特殊的生物安全Ⅲ级实验室,进出该实验室的所有物品包括空气都需灭菌处理。

(二)超净实验室

图2-1 超净工作台

左图为生物安全Ⅱ级超净工作台,右图为普通超净工作台

超净实验室一般包括无菌操作间、缓冲间和更衣间(图2-2)。整个超净实验室的空气是经滤过后通过送风系统将洁净的空气送入密闭空间。空气洁净度一般要达到104颗粒/m3以下,细胞培养无菌操作间的局部空气洁净度要达到102颗粒/m3以下。可根据实验规模确定无菌操作间的大小,一般至少应为3~5m2,可容纳两人同时操作。CO2孵箱、显微镜和离心机可放置在缓冲间。整个超净实验室应有紫外杀菌装置和滤过空气的恒温恒湿装置。无菌操作间的房顶、墙壁、地面均应光滑、无死角,并定期(每1~2周)进行清洁、消毒、检测。

无论选择哪种操作设备条件,在日常的工作中要时时保持操作台面的清洁,而且还要定期更换设备的中效、高效过滤系统,可根据设备使用频率和使用时间长短而定。通常工作情况下1.5~2年更换一次。特别是,如果近期反复出现类似霉菌酵母菌污染,经过多次采取措施而无效者,就应该考虑彻底更换中高效过滤器。

图2-2 超净实验室无菌操作间一角

图片中为洁净度为102级的操作台

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